Форумы ANCHEM.RU: Витамины методом микроколоночной ВЭЖХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Витамины методом микроколоночной ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 39
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

06.05.2011 // 17:53:48

Oxana.86 пишет:
А я только жирорастворимые делаю для клиентов за плату. Водорастворимые - только для внутреннего пользования. Я тоже понимаю, что 1г/т - это не реально, но вот начаьство по-другому думает.

И от этого что-то меняется?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Анна биохимик
Пользователь
Ранг: 4

30.04.2013 // 16:22:40

Если не секрет расскажите пожалуйста как у вас дела обстоят с жирорастворимыми витаминами? У нас большая проблема с их постановкой, витамин К очень плохо выходит... И пробоподготовка не очень удобная.
А в водорастворимых постоянно рибофлавин лезет в холостой, уже как ни промывали, все равно есть. Подскажите, пожалуйста, может кто-то сталкивался с такой же проблемой?

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

01.05.2013 // 8:29:33

Анна (михална?) вы так вопрос ставите, что чел вам должен целый трактат написать. Ни условий, ничего не привОдите, но этот "лезет", а тот "не виден, как и Сатурн"? Что за детские вопросы?
По витаминам только ленивый не публиковался и теперь море макулатуры разной издается. Читайте в тырнете все можной найти.
И не надо было эту некротему поднимать. Постите новый тред, с учетом замечаний.

valerra
Пользователь
Ранг: 141

11.05.2013 // 9:45:05

КонстантинС пишет:
Мне вот интересно - почему говорят "микроколоночная ВЭЖХ"? Раньше, на западе, может, это и было разумно - поскольку кто-то сначала нашел хорошие трубки с диаметром 4.6 мм (Уотерс, правда, 4.0 мм), колонки получились хорошие, и этот размер стали клонировать. А 2 мм было в диковинку - поэтому и говорили про микроколоночную ВЭЖХ.
Теперь же всем все стало более-менее ясно, что 4.6 - это просто дань древней традиции, и поэтому повсеместно переходят на колонки с диаметром 2 и 1 мм (для 5 микронника, для 3х - 4.0 мм). ОГдним словом, приставка "микро" перестала нести какой-либо смысл.

Когда попал на фармпроизводство, хозяина которого убедили в том, что хроматографическая колонка не живет больше года, даже если просто лежит без работы

то я, конечно оттянулся по полной программе - и по фазам прошелся и по зерну, и геометрическим размерам. И общее впечатление сложилось так, что чем меньше диаметр колонки, тем почему-то хуже воспроизводимость. Т.е. если из диаметра 4,6 по десяти закроем пробы удавалось выжать относительное стандартное отклонение площади пика порятка 0,01%, то из 2,0 RSD ниже 0,3% не получалось. Если у препарата допуск по количественному +/- 5%, то это уже немного критично. Поэтому оставил только один диаметр - 4,6 мм, даже для зерна 1,8, а от остальных размеров отказался.

vmu
Пользователь
Ранг: 1338

11.05.2013 // 20:21:14

valerra пишет:
Если из диаметра 4,6 по десяти закроем (заколам?) пробы удавалось выжать относительное стандартное отклонение площади пика порятка 0,01%, то из 2,0 RSD ниже 0,3% не получалось.

А объём пробы для колонок обоих размеров был одинаковым? А площади пиков сильно различались? Чем меньше объём вводимой пробы и площадь пика, тем выше RSD.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Химмед
Официальный дистрибутор ведущих компаний, таких как Merck, Acros Organics, Calbiochem, Fluka, IKA, Labscan, Roth, Sigma-Aldrich. Supelco, ОАО "Химлаборприбор" и др.

+Xenofil
Пользователь
Ранг: 1436

12.05.2013 // 11:40:09

vmu пишет:
А объём пробы для колонок обоих размеров был одинаковым? А площади пиков сильно различались? Чем меньше объём вводимой пробы и площадь пика, тем выше RSD.

Вот!
Мне сразу захотелось уточнить под какую конфигурацию (4,6 или микро…) был рассчитан объем имеющегося в системе детектора.
Ставить микроколонку, обеспечивающую разделение малого объема пробы, без соответствующего ей по объему детектора, видимо, некорректно.
Когда аналит расползается по здоровой кювете детектора, то обеспечить метрологические характеристики всегда легче с большим объемом пробы.
Так можно обосновать и применение еще более широких колонок.

Чем то мне это напоминает классику жанра – измерение температуры насекомых во времена отсутствия температурных микродатчиков. Типа – взять стакан жучков (муравьев) и сунуть туда обыкновенный ртутный термометр. Другой вопрос, что при этом надо еще будет учитывать особенности теплообмена со средой отдельного насекомого, в отличие от неизбежно более высокой «насыпной» температуры.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

16.05.2013 // 6:29:59

+Xenofil пишет:
Вот! Мне сразу захотелось уточнить под какую конфигурацию (4,6 или микро…) был рассчитан объем имеющегося в системе детектора.

А тут есть, о чем рассуждать?

Он там "резвился", а вам делать нефиг, как его результаты разъяснять?

valerra
Пользователь
Ранг: 141

28.05.2013 // 22:29:21

Serga пишет:

+Xenofil пишет:
Вот! Мне сразу захотелось уточнить под какую конфигурацию (4,6 или микро…) был рассчитан объем имеющегося в системе детектора.
А тут есть, о чем рассуждать? Он там "резвился", а вам делать нефиг, как его результаты разъяснять?

Да я и словов то таких не знаю. Мне надо дать продажный и беспроблемный товар. А в случае Минска объем пробы упирается в то, что контролирующая организация имеет только один прибор с автосамплером. На остальных стоят петли ручного ввода с минимальным объемом в 2 микролитра. От этого и пляшу

А объем ячейки детектора - так про такое вообще никто не слышал. Что привезут - на том и работа идет. А на том, что возят - диаметр 4,6 оказался оптимальным.

FeroxDS
Пользователь
Ранг: 15

19.06.2013 // 21:24:47

Доброго времени суток колеги. Хотел бы получить помощи от вас.
Сначала предыстория. Я сам молекулярный биолог, и основной моей работой является анализ продуктов на содержание ГМО. Не так давно у нас сократился штат и меня отправили в лабораторию химического анализа осваивать ВЭЖХ. Сейчас основной задачей является определение водорастворимых витаминов В1, В2, В3, В5, В6 и фолиевой кислоты. Прочитав множества разных методик остановился на одной из них, вроде результаты получаю, но они какие-то не однозначные. Иногда результаты совпадают с заявленными в анализируемых продуктах, иногда вообще зашкаливают за все разумные пределы.
Очень хотел бы получить от вас помощи или совета. Ниже постараюсь описать методику, по которой я работаю.
ВЭЖХ agilent 1200 с VWD и FLD детекторами, Колонка Zorbax SB-C18 4,6х150мм 3,5мкм
Подвижная фаза А –ACN
Пподвижная фаза В – Н2О Рh 3,0 доведенная H2SO4(по методике 2,0, но я побоялся испортить колонку поэтому ставлю 3,0)
Стандартные растворы витаминов готовлю из расчета 50мг на 50мл. Так чтобы концентрация была 1мг на 1 мл. Для каждого витамина отдельно
Рабочий стандартный раствор: 20мкл Стандартного раствора (каждого из шести витаминов) + 880мкл HCl 0,1М. Таким образом стандарт для прокола содержит по 20мкг каждого из витаминов.
Характеристики вкола: Вкол 20мкл; поток 1,5 мл; градиент 0-3мин 2%А + 98%В, 3,5-10мин 20%А + 80%В (градиент подбирал эмпирически); длина волны VWD - 262нм (для витамина В6 300нм).
Делаю в среднем 5 проколов стандарта для насыщения колонки и пока выходящие пики не станут стабильными, после чего запускаю образцы для исследования.
Вот тут и начинаются проблемы, методы для извлечения витаминов для разных групп продуктов разные (молочные, премиксы, бады и т.д.). Пытался делать и по Скурихину и по ГОСТам и по другим методикам и всегда результаты разные. Остановился на одной методике: 1г продукта + 10мл HCl 0,1М, все это гомогенизирую, растворяю (по мере возможности), помещаю в пробирку с прикручивающийся крышкой, и ставлю при 65С на твердотельный термостат 10мин. Затем на УЗ Баню 15 мин, после чего фильтрую, ц-фугирую при 8тыс обор/10мин., отбираю 200мкл фильтрата и довожу до 1мл 0,1М HCl . Собственно, это и вкалываю. При получении результатов с ВЭЖХ количество некоторых витаминов может на порядок быть больше чем заявлено в ТУ.
Чувствую, что где-то допускаю ошибку, но не могу понять где. Подскажите!
Заранее благодарю! С уважением.


Ответов в этой теме: 39 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты