| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Аминокислоты до С7,методом ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Аминокислоты до С7,методом ВЭЖХ | ||
|
panoleg Пользователь Ранг: 10 |
 30.11.2004 // 12:00:53
Редактировано 1 раз(а) Помогите дилетанту,где копать.Есть жидкостной хроматограф KNAUER с UV детектором К-2501. Несколько колонок Диасорб: -130-ИДК,-130-ТА,-60-Силикагель. Как применить все это хозяйство к анализу водных растворов Аминокислот. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Сергей Ф. Пользователь Ранг: 5 |
30.11.2004 // 14:52:05
Осуществить анализ аминокислот при Вашей конфигурации ВЭЖХ системы вполне реально. Необходима какая-нибудь ОФ колонка (желательно С18) и дериватизирующий агент (рекомендую DABS-Cl).После предколоночной дериватизации и хроматографического разделения Вы сможете "увидеть" практически любую аминокислоту на длине волны 436нм. Элюент: 25мМ ацетат натрия-ацетонитрил в градиенте. |
||
|
panoleg Пользователь Ранг: 10 |
30.11.2004 // 16:51:34
Есть еще колонка Диасфер-110-С18.Что такое в градиенте.DABS-Cl я понимаю Диметиламиноазобензол-сульфанилхлорид. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
01.12.2004 // 10:05:24
Редактировано 1 раз(а) Градиент - плавное и, как правило, линейное изменение силы элюента в процессе хроматографирования образца. К примеру, Вы начинаете анализ при концентрации ацетонитрила, скажем, 20%. в процессе анализа повышаете содержание ацетонитрила до 50% при котором и заканчиваете анализ. Правда, не все приборы позволяют организовывать градиент. Но даже если у вас изократический прибор, можно качественно разделить все компоненты и без градиента, но придется снимать хроматограммы 2-3 раза с повышающимися концентрациями ацетонитрила. Колонку берите, которая Диасфер С18. ИДК и ТА лучше не использовать, они совсем для других целей. |
||
|
panoleg Пользователь Ранг: 10 |
02.12.2004 // 9:27:25
Леонид и Сергей Ф спасибо за информацию. Хотя как всегда больше информации порождает больше вопросов. С18 я попробовал. Элюет использовал дист. воду. Длину волны выбрал 206 нм. (определил по СФ)-линейная зависимость. Поэтому первые вопросы: как скажется использование дист. воды на колонке. Что даст использование дериватизирующего агента. |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
02.12.2004 // 14:31:32
При использовании чистой воды на колонке данного типа цепочки С18 через некоторое время "схлопнутся" и колонка потеряет свои качества. Для водных элюентов без органики существуют специальные колонки, об этом писалось в теме "ВЭЖХ". Кроме того, даже на них ничего путного для недериватизированных аминокислот не получить - пики будут хвостить, разделить ничего толком не удастся, чувствительность низкая. Недериватизированные делят на ионообменниках и определяют с нингидрином после колонки. Дериватизация (химическая пришивка поглощающей или флуоресцентной группы по амину) позволяет не только значительно улучшить удерживание на обращенке (С18), но и достичь отличной формы пиков, требуемой селективности и повысить чувствительность на порядки (особенно с флуоресцентным детектором, но и УФ тоже будет работать неплохо). Дериватизирующих агентов для аминокислот много, обо всех рассказывать у меня сейчас времени нет. То что Вам уже предложили - очень приемлемый вариант. Если нужны условия дериватизации - спрашивайте, найду время - отвечу в деталях. Или коллеги ответят. Водные растворы - не плазма крови, проблем не будет. А Вы пока не теряйте времени, почитайте, что-ли хоть книжки какие по ВЭЖХ. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
02.12.2004 // 15:49:08
Если концентрации аминокислот достаточно большие, то их можно делить и без предварительной деривации с регистрацией УФ детектором при 204-210 нм. Только для этого нужно использовать ион-парный вариант обращеннофазной ВЭЖХ если работаете на С18 или режим динамического индуцирования раздела фаз на немодифицированном силикагеле (кстати, есть ли у Вас такая колонка?). В противном случае, как Вам правильно сказали, не удастся добиться нормального удерживания и хорошей формы пиков аминокислот. Если Вы приведете перечень необходимых Вам аминокислот, то я смогу подкинуть условия разделения, вплоть до ориентировочных составов элюентов. |
||
|
panoleg Пользователь Ранг: 10 |
02.12.2004 // 16:53:12
Редактировано 6 раз(а) Я вообще-то синтетик,а так как в конторе остался один из химиков(остальные биологи)(хроматографист уволился), то мне ткнули нахимичил ты и разбирайся. Леониду: А нужно искать Аминокапроновую кислоту в промывных водах в процессе синтеза.,Диасорб:-60-Силикагель,Силасорб 600. |
||
|
татьян Пользователь Ранг: 1 |
02.12.2004 // 17:08:32
Ребята, помогите!!! Посоветуйте где можно найти метод определения уровня кадаверина в цервикальной слизи шейки матки. Я вообщето врач-гинеколог и сейчас пытаюсь кропать диссер. Буду благодарна за любую инфу. Чирките, плиз на почту: trushvla@rol.ru |
||
|
Дмитрий (anchem.ru) Администратор Модератор форума Ранг: 4445 |
02.12.2004 // 18:24:59
Начните новую тему... |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
02.12.2004 // 19:41:26
Редактировано 1 раз(а) А какие концентрации? Если очень низкие, то прямое определение не потянет. Но градиент вряд ли нужен. Вот, к примеру, ссылочка на определение в сыворотке. Ваш случай наверняка проще. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 29
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
