| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Почему пики не зависят от концентрации? ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Почему пики не зависят от концентрации? ВЭЖХ | |||||
|
svet2004 Пользователь Ранг: 32 |
 14.08.2008 // 21:04:31
Надо провести анализ проб с кетоконазолом. Удалось подобрать подвижную фазу где пики появились, приступила к градуировке - и столкнулась с такой проблемой: первый пик довольно большой, даже если концентрация у этого раствора самая маленькая, следующий пик значительно меньше, а каждый следующий пик меньше или равен предыдущему. Я подумала что препарат абсорбируется на стекле- но при анализе из эпендорфов все тоже самое, пыталась менять длину волны и пробовала растворять в-во в метаноле, подвижной фазе, варьировать количество воды - но с точки мертвой не сдвинулвсь. Я теперь даже не знаю в какую сторону копать. Знающие люди, подскажите пожалуйста! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
14.08.2008 // 21:20:13
А нельзя ли поподробнее? Колонка (сорбент, размеры зерна и колонки), прибор, состав подвижной фазы и условия проведения анализа, время выхода компонентов пробы. Анализировали стандартный образец , субстанцию или сразу приступили к анализу лекформы, в последнем случае какая лекформа: таблетки, крем или шампунь и какова пробоподготовка? |
|||||
|
svet2004 Пользователь Ранг: 32 |
14.08.2008 // 21:31:43
Редактировано 2 раз(а) Колонка Luna C18 (2), 5 мкм, 4.6 х 150 мм (Phenomenex). хроматограф Knauer. Подвижная фаза - фосфатный буфер с рН=6/ацетонитрил=50/50, скорость потока 1 мл/мин, температура комнатная - сегодня было почти 30 градусов по цельсию. Время выхода 7,6 минут. Задача определить в плазме крови. Но ничего не выходит еще на этапе работы со стандартным веществом. |
|||||
|
trozen Пользователь Ранг: 216 |
15.08.2008 // 0:49:18
похоже, что то, что вы видите - вовсе не кетоконазол. подробности о стандартном веществе и пробоподготовке и вправду не помешали бы.. |
|||||
|
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
15.08.2008 // 1:02:04
Редактировано 1 раз(а) Попробуйте сдвинуть значение pH буфера до 5.0, правда при этом возможно надо будет уменьшить содержание ацетонитрила. |
|||||
|
Илья226 Пользователь Ранг: 354 |
15.08.2008 // 6:48:13
Редактировано 1 раз(а) кетоконазол- цис-1-Ацетил-4-[4[[2-(2,4-дихлорфенил)-2-(1H-имидазол-1-илметил)-1,3- диоксолан-4-ил]метокси]фенил]пиперазин...выпускается в таблетках. Растворимость не смотрели? УФ спектр? Если вы готовите стандарт из таблеток то либо растворяете какое то от вспомогательных веществ, либо из-за высокой липофильности он садится на колонке и не выходит. В общем расскажите ка подробнее про стандарт...из чего готовили...как испытывали и т.д. и т.п. Кстати при последующей промывке колонки 100% ацетонитрилом никаких пиков не вылазит? 50% по моему маловато.....прогоните градиентом от 0 до 100 с последующей изократикой ацетонитрилом и посмотрите. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
svet2004 Пользователь Ранг: 32 |
15.08.2008 // 10:33:26
Стандарты мне привозят в эпендорфах: беленький порошок в воде не растворим. Прилично растворяется в метаноле, удалось растворить в смеси метанол-вода(50/50), хорошо растворяется в подвижной фазе. Меряла спектры всех указанных растворов - есть пик на 208-209 нм, плато на 240. За совет спасибо - сейчас буду пробовать |
|||||
|
Илья226 Пользователь Ранг: 354 |
15.08.2008 // 11:32:38
Фазы с трифторуксусной кислотой не пробовали? Элюнет А- 0,1% ТФУ элюент Б- ацетонитрил. Спектры меряли как? Приготовленных стандартов на спектрофотометре или выходящего пика на жидкостнике? Со справочными данными совпадает? Удельный показатель большой? Вообще странно...система сопряженная, несколько гетероциклов...должен повыраженее спектр наблюдаться. |
|||||
|
svet2004 Пользователь Ранг: 32 |
15.08.2008 // 11:51:44
пробовали фазу с ТФУ, правда там еще ДДС натрия был... мерили спектры стандартов на спектрофотометре. А не дадите ссылочку на источник, по которому вы интересуетесь про ТФУ- я вот ни в одной статье фаз с нею не видела... |
|||||
|
Vobla Пользователь Ранг: 2 |
15.08.2008 // 16:09:17
Редактировано 1 раз(а) ______________________________________________________ Скорее всего кетоконазол вылетел с колонки сразу. Рекомендую для начала градиент от 5% ACN в воде до 70%. рН можно довести фосфорной к-той до 3,5; детектор - для начала 210, потом 254 нм, петля - 10-20 мкл. Для поиска в сыворотке, прикиньте возможные конц. этого товара в крови, его экстинцию, возможный объем петли. Судя по всему, УФ-детектор с его невысокой чуствительностью Вам не пригодится. |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
15.08.2008 // 16:46:54
Редактировано 1 раз(а) И раз уж Вы через колонку додецилсульфат прокачали, снимите ее и используйте ТОЛЬКО для подвижных фаз его (ДДС) содержащих, поскольку он теперь лет 100 с нее смываться будет, и в течение всего этого периода у Вас могут плыть времена удерживания. А для элюентов, НЕ содержащих ионпарных реагентов, применяйте отдельную колонку. PS Кстати, наберите в Гугле " ketoconazole HPLC " и вам сразу столько ссылок вывалится... Например, эта: |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
