Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

определение глутатиона >>>

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: определение глутатиона
LVD
Пользователь
Ранг: 219

19.12.2008 // 9:50:17     
Редактировано 1 раз(а)

Уважаемые коллеги!
Может быть кто-нибудь занимался анализом окисленного, восстановленного глутатиона. Трипептид из цистеина, глутаминовой кислоты и глицина. Знаю, что красится либо нитропруссидом натрия (красный), либо фосфорновольфрамовой кислотой (синий), либо смесью ди-нитробензола с едким натром (желто-зеленый). М.б. где-то есть подробная методика, чтобы не изобретать велосипед. А если вместо спектрофотометра - СЕ с диодной матрицей? Но отдельно окисленный восстановленный надо вживую?
Заранее благодарю.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
LVD
Пользователь
Ранг: 219


19.12.2008 // 9:52:41     
Да, объект - растительная ткань.
LVK
Пользователь
Ранг: 37


21.12.2008 // 21:45:03     
Редактировано 1 раз(а)

У Армстронга есть протокол ВЭЖХ для плазмы крови (ТФЭ без дериватизации, DAD 210 нм). Мыло напишите, я скину.

Биохимики обычно определяют GSH с дитионитробензойной к-той (реагентом Эллмана), окраска желтая, макс 410 или 420 нм. GSSG, насколько я помню, восстанавливают до GSH. Но без разделения будут артефакты - цистеин и т.п.
LVD
Пользователь
Ранг: 219


22.12.2008 // 4:23:02     
Мыло laser{coбaчkа}sifibr.irk.ru.
Спасибо большое.
LVK
Пользователь
Ранг: 37


22.12.2008 // 11:42:50     
Ушло, гл. 13
LVD
Пользователь
Ранг: 219


23.12.2008 // 10:38:42     
Еще раз огромное спасибо.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Лабораторный шейкер US-3504L Лабораторный шейкер US-3504L
Предназначены для создания вращательного движения жидкости в пробирках и лабораторной посуде. Шейкер используется в микробиологии, вирусологии, биохимии, биологии и т.д. Таймер: 1 - 1199 мин. Диапазон скорости вращения: 100 - 350 об./мин.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
АлаЯ
Пользователь
Ранг: 80


23.12.2008 // 11:37:33     
Если не сложно, поделитесь и со мной этой статьей.
Заранее благодарна.
lalka-s{coбaчkа}mail.ru
LVK
Пользователь
Ранг: 37


23.12.2008 // 22:02:25     
Ушло тоже, вынимайте.
АлаЯ
Пользователь
Ранг: 80


24.12.2008 // 10:35:57     
Огромное спасибо!!!
LVD
Пользователь
Ранг: 219


18.11.2010 // 8:06:09     
По протоколу Армстронга пытались делить на имеющейся чешской колонке окисленный и восстановленный глутатион. Не получилось, вернее получилось не очень, не до базовой. Решили, что из-за колонки, хотя, конечно, пробовали менять условия - pH элюэта, соотношение в нем органики и водного 0,05% ТФУ, пробовали и 0,1% ТФУ. Прибор - Шимадзу LC10, колонка была С18, 3*150, 100*5, Сепарон. Сейчас приобрели Кромасил, также С18, 25*4,6, 100, 5. Есть предколонка. Успехов не достигли. При скорости элюента, указанной в протоколе 1 мл/мин, почти совсем не делится (10% высоты), подобрали такие условия - колонка указана выше, скорость элюента 0,5 мл/мин, элюент метанол:0,05%ТФУ 50:50, петля 5 мкл, пробовали 20, чуть хуже, 100 мкл из протокола, много хуже. Да, ввод ручной. Детектор УФ (190-340 нм, т.е. не покрасишь). Длина волны 210 нм. Температура колонки 30 градусов. Концентрация стандартов по 0,5-0,25 мкг/мл. Стандарты всегда свежие, смешиваем перед вколом. Разведены элюентом. Пробовали градиент : уменьшали органику, увеличивали, с разной скоростью. Делятся плохо, хуже, чем в изократе. Градиент в нашем приборе низкого давления.Наверное, есть смысл попробовать какой-нибудь фосфатный буфер?
Может быть кто-нибудь сталкивался с подобной задачей? Были бы очень благодарны за совет.
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


18.11.2010 // 18:52:14     
Редактировано 3 раз(а)

GSH, GSSG и плюс еще 2 пептида "сверху" делил в HILIC mode на обычном силикагеле. Детектировал правда - MS/MS (MRM mode).

Может проще предкол. дериватизацию для УФ-ВИД сделать, чем "париться" с 210нм? Да и хром. поведение изменится.

Разделить данную пару на Sil C18, конечно, проще, используя градиент. Темп. сделайте комнатную. Замените метанол на ацетонитрил, или сделайте микс. Вместо ТФУ (0,025-0,05%об.) можно взять фосфатный буфер (25-50мМ), фосфатный буфер + ТЕА, LiClO4 и т.д.
Да и делайте все "правильно".

  Ответов в этой теме: 12
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты