| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Приготовление пластин для препаративной тонкослойной хроматографии (ТСХ) >>>
|
 |
| Автор | Тема: Приготовление пластин для препаративной тонкослойной хроматографии (ТСХ) | |||||
|
oiv Пользователь Ранг: 3 |
 14.04.2009 // 15:33:06
Здравствуйте! Пожалуйста,откликнитесь,у кого есть опыт приготовления препаративных пластин с незакрепленным слоем силикагеля. Нужен совет,подскажите что нужно сделать чтобы слой не растрескивался? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
gingerino Пользователь Ранг: 207 |
15.04.2009 // 7:30:03
Редактировано 1 раз(а) Собственно закреплять. Вводить силиказоль (как в большинстве пластин) или крахмальный клейстер (как на силуфоле, например) в силикагель. |
|||||
|
oiv Пользователь Ранг: 3 |
15.04.2009 // 12:12:09
Спасибо большое,что откликнулись на мою просьбу.Поскольку с такой работой сталкиваюсь впервые,может подскажете каким крахмалом пользоваться и в каких пропорциях? |
|||||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
15.04.2009 // 13:59:43
Крахмалом лучше ввобще не пользоваться! Единственное исключение- делить стереоизомеры, но и то в условиях полной нищеты лучше делать это на бумаге ( а еще лучше вообще не делать) Удобными связующими являются во первых гипс ( но х,ч а не строительный) , во вторых силиказоль, который можно приготовить из силикатного канцелярского клея, прикапывая к нему разбавленную соляную кислоту. Подробно приготовление пластинок методом выливания описано в очень старых книгах ( типа ГФ X СССР 1967 г выпуска) , наиболее подробно из доступных в Шаршуновой (Пракическая тонкослойная хроматография) |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
15.04.2009 // 14:02:26
Редактировано 1 раз(а) Обычно берут так называемый "водорастворимый" крахмал (используется для приготовления субстрата при определении альфа-амилазы в больничных лабораториях), в количестве 0,5 - 1% от объема воды. Например, 100 мл. Эту порцию делят на две части. 30 мл и 70 мл. В 30 мл суспендируют навеску крахмала, а 70 мл в стеклянной колбочке или стакане нагревают на плитке до кипения. При закипании в колбочку вливают суспензию крахмала и помешивают. При этом крахмал заваривается и раствор становится прозрачным. Этот раствор используют для приготовления суспензии силикагеля или микрокристаллической целлюлозы для нанесения на стеклянные подложки ТСХ. Но Вам, как я понял, нужно получить именно незакрепленный слой. С такими пластинками работать очень сложно (они осыпаются). Поэтому хроматографируют их в горизонтальных камерах с подведением растворителей с помощью всякого рода "фитилей". Вот пример приготовления ТСХ пластин с незакрепленныим слоем сорбента. Выдержки из работы по выделению фосфолипидов: Приготовление адсорбента и нанесение его на пластинки В качестве адсорбента для тонкослойной хроматографии использовали чешский силикагель марки 5/40л, обработанный следующим образом: 200г адсорбента переносили в сосуд, заполненный дистилированной водой до уровня 30 см., тщательно взмучивали и осаждали суспензию в течение 3 минут. Недосадочную жидкость сливали в другой сосуд, добавляя в него воду, доводили высоту ее слоя до 30 см. И после тщательного взмучивания взвеси проводили седиментацию в течение 10 минут, после чего раствор декантировали. Данную процедуру повторяли 5-6 раз, пока дадосадочный слой жидкости не становился прозрачным. В результате в осадке получали фракцию сорбента с размерами частиц от 0,045 мм(45 мкм) до 0,032 мм (32 мкм), что соответствует 330-460 меш. Затем силикагель высушивали под вакуумом на воронке со стеклянным фильтром и последовательно промывали метаном, хлороформом, эфиром (по 0,5 мл. каждого на 1г. геля). Очищенный сорбент сушили при 120 С в течение 24 ч. и хранили в герметически закрытой банке. Адсорбент наносили на пластинки методом осаждения его из водных суспензий. Этот метод позволяет получить без закрепителя прочно удерживающийся на стекле однородный , равномерный слой. Для нанесения силикагеля на фотографическую кювету размерами 50х220х280 мм. устанавливали на строго горизонтальную поверхность. В нее помещали две одинаковые стеклянные палочки, которые располагались параллельно друг другу по ширине кюветы и плотно прилегали к ее дну. Из очищенной фракции сорбента готовили 1,8 л. Суспензии, содержащей 2,8 г. геля на 1 литр воды. Одновременно в суспензию добавляли 5 г. соли К2СО3, присутствие которой в слоях силикагеля обеспечивало более четкое и полное выделение фракции фосфолипидов. Содержимое стакана тщательно перемешивали, добиваясь получения равномерной суспензии. Полученную взвесь быстро выливали в кювету, туда же незамедлительно погружали четыре стеклянные пластинки, располагая их рядом на палочках так, чтобы они не касались друг друга и стенок кюветы во избежание образования неравномерного слоя сорбента. Толщина слоя жидкости над пластинками составляла 2,8 см. В течение 10 минут происходило полное осаждение частиц силикагеля. При совпадении указанных условий количество адсорбента , оседающего на 1 см2. Поверхности пластинки равнялось 5-7 мг. Толщина слоя регулировалась изменениями концентрации силикагеля суспензии. По истечении 10 минут жидкость медленно отсасывали с помощью сифонного устройства, конец которого погружали до самого дна кюветы, чтобы предупредить повреждение слоя при отсасывании. Пластинки, не вынимая из кюветы, сушили на воздухе до тех пор, пока нанесенный слой силикагеля не терял прозрачности и не становился матовым, что соответствовало упариванию примерно 50% исходного количества воды. Приготовленные пластинки подвергали активации при 120 С в течение 15 минут. После чего тонкий слой окаймляли, снимая по боковым пластинкам полосу сорбента шириной до 5 мм. Активность приготовленного таким способом силикагеля соответствовала 4-5 степени активности по Брокману (12,5% воды). |
|||||
|
Олег Пользователь Ранг: 528 |
15.04.2009 // 15:41:15
Удобными связующими являются во первых гипс ( но х,ч а не строительный) , во вторых силиказоль, который можно приготовить из силикатного канцелярского клея, прикапывая к нему разбавленную соляную кислоту. Интересовался у производителей "Сорбфила" почему не выпускают пластинки для препаративной хроматографии. Ответили, что растрескиваются. И ничего поделать не могут. Пробовал и сам приготовить пластинки с силикагелем и так и в смеси целлюлозой и закреплял и крахмалом и гипсом. Трескаются!!! Сушил самыми разными способами, медленно на воздухе, бысто - грел, отжимал на пластинке фильтровальной бумагой - трескались. Нужна некоторая тонкость. Но не сумел найти. Купил мерковские... |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
15.04.2009 // 16:28:48
Редактировано 2 раз(а) Лет 35 назад, когда я был еще маленьким ))), о пластинках с закрепленным слоем мы только слышали, и то об аналитических - "Силуфоле". А препаративные делали сами, именно с незакрепленным слоем и очень просто. Брали фотопластинку со смытым фотослоем подходящего размера, насыпали на нее сухие силикагель или окись алюминия "Для хроматографии", затем стеклянной палочкой с надетыми на ее концы резиновыми колечками разравнивали слой. (Длина палочки - чуть больше ширины пластинки, расстояние между колечками - желаемая ширина слоя адсорбента, толщина стенки колечек - желаемая толщина слоя сорбента). На расстоянии ~ 2 см от одного из концов наносили линию раствором разделяемой смеси, давали высохнуть. Эту процедуру можно повторять несколько раз - определяется экспериментально. После высыхания помещали наклонно, угол сами определите - чтобы не ссыпалось - в широкий кристаллизатор (диаметром больше диагонали пластинки) так, чтобы нижний конец с нанесенной смесью упирался в стенки кристаллизатора, а под верхний что-нибудь подставляли подходящее типа большой стеклянной пробки или специально изогнутой стеклянной палочки. До этого делали 2 важные вещи: 1) притирали к кристаллизатору стеклянную же крышку, чтобы элюент не испарялся и 2) наливали сам элюент, так, чтобы он закрывал ~ половину от начала пластинки до нанесенной пробы. Далее 1, 2, и т.д. раз прогоняли элюент (но лучше конечно подбирать элюент так, чтобы одного раза хватило), вынимали пластинку и сушили слой, желательно на краю тяги в потоке воздуха. После определения, где же находятся разделяемые вещества (у нас такой проблемы не было, так как работали с окрашенными веществами) собирали нужные зоны. Собственно, последний абзац к заданному вопросу уже не относится. Проблем с растрескиванием слоя (миллиметров 3-5) у нас не было. PS Для нанесения слоя сорбента полезно использовать специальный столик, который представляетсобой корытце, чтобы было куда ссыпаться сорбенту, в котором закреплена подставка для пластинки, которая не дает пластинке свободно перемещаться во время процедуры нанесения сорбента. |
|||||
|
oma12 Пользователь Ранг: 54 |
15.04.2009 // 17:09:28
Мы используем подобную технику нанесения силикагеля на пластину, слой нормальный, не растрескивается. В качестве пластины используем пропескоструенное стекло (с шершавой поверхности силикагель не слазит). В силикагель добавляем немного люминофора для удобства проявления. |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
15.04.2009 // 18:33:39
Да он и с гладкой не слезет, если угол нормальный подобрать. 
|
|||||
|
oiv Пользователь Ранг: 3 |
16.04.2009 // 8:13:56
Огромное спасибо всем за Ваши ответы!!!!! Теперь у меня столько информации! Побежала работать,надо скорее доделывать диплом! |
|||||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
16.04.2009 // 10:59:31
Там много тонкостей, все не опишешь. Во первых количество связующего . Во вторых количество воды ( консистенция должна быть как у жидкой сметаны) , в третьих качество помола силикагеля, в четвертых гладкость стекла ( лучше шероховатое) , в пятых качество обезжиривания стекл перед нанесением , в шестых режим сушки ( при нагреве они трескаются, нужно высушивать на воздухе , я их вообще не активировал), в седьмых толщина слоя ( толстый слой коркуется и при сушке отслаивается) в восьмых... Все это удается подобрать только практикой и эмперически, тк руки у всех разные. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
