| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Хроматография или изофокусирование белков >>>
|
 |
| Автор | Тема: Хроматография или изофокусирование белков |
|
23ezhik Пользователь Ранг: 4 |
 20.05.2009 // 18:32:07
Редактировано 1 раз(а) Добрый день. Встал вопрос. Можно ли провести гель-хроматографию для суммарного водного извлечения белков на сефадексе g25, может я вообще что-то не то спрашиваю.. что-то в себе засомневался. Масса белков может варьироваться от 64 до 200 кДа. Получится разделить фракции, или они все вместе пойдут? Основная цель - выделить активный фермент, то есть нельзя давать дегидатирующие сильные и инактивырующие добавки... Тогда что можно? Или единственным способом будет электрофорез в полиакриламиде? |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
21.05.2009 // 9:54:10
Обычно активный фермент выделяют афинной хроматографией из смеси балластных белков (простенько и со вкусом). Для ГПХ на сефадексе нужно знать диапазон эксклюзии. Я навскидку не помню этого для Ж25, поэтому посмотрите в справочниках. Если Ваши массы белков попадают внутрь этого диапазона, то этот сефадекс пригоден, если нет, то поищите тот у которого диапазон эксклюзии будет подходящим. Только в этом случае ГПХ подойдет. Для того чтобы определить в какой из фракций находится искомый белок, то Вам понадобится коллектор фракций. Затем нужно будет отбирать аликвоты для контроля активности из всех собранных белковых фракций . Обычно для подобной ГПХ используют в качестве ПФ раствор бикарбоната аммония (0,05 М), чтобы при обнаружении целевого белка с помощью лиофильной сушки получить чистый белок без солевых примесей (буфер является летучим и легко удаляется при сушке). При электрофорезе в ПААГе Вы вряд ли отыщете фракции с активным ферментом, тем более не сможете выделить то что нужно. Обычно для таких вещей используют изоэлектрофокусировку с применением амфолитов в агаровых блоках и горизонтальном варианте электрофореза, либо изотахофорез в колонне. Но потом нужно избавляться от амфолитов и буфера. Не каждый нативный фермент это выдержит. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 1 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
