| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Методика определения аскорбиновой кислоты для ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Методика определения аскорбиновой кислоты для ВЭЖХ | ||
|
Jktym Пользователь Ранг: 15 |
 13.08.2009 // 10:39:28
Нужна методика для анализа !!! |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
 13.08.2009 // 14:31:56
Ну и ищи в интернете, в чем проблема-то?  Бстрее найдешь. Тут пока появится, кто с этим знаком, море времени пройдет.
|
||
|
N-Виталий Пользователь Ранг: 630 |
14.08.2009 // 11:46:12
аскорбинка очень хорошо делается, можно на перхлорате (кстати фармакопейная методика) при скорости 0,15 выходит на 3-4 минуте (миллихром А-02) на waters подольше (зависит от колонки), а в чем определять будете? |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
14.08.2009 // 15:51:57
Я для "таблеток", например, использовал такую хром. систему: Колонка: Диасфер-110-С16 150*4,6 Элюент: МеСN:0.05М Na2SO4 + H3PO4 (pH=2.5) 3:97 %об. (изократ.) УФ: 260нм (при 220нм "видно" дегидроаскорбиновую кислоту) С элюентом я тогда извратился, можно было взять просто 0.1-0.05М КН2PO4 pH=2.5-3 З.Ы.: Вы хотя бы указали объект и т.д. Если будете экстрагировать откуда либо, то возьмите водный раствор щавелевой кислоты (0,1-0,02М) |
||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
14.08.2009 // 15:57:45
Лучше вместо щавелевой кислоты добавить ЭДТА , аскорбиновая кислота легко окисляется кислородом воздуха, а ионы металлов типа железа или меди здорово катализируют данный процесс |
||
|
Jktym Пользователь Ранг: 15 |
14.08.2009 // 18:14:29
Объект исследования листья плодово-ягодных растений, пытаемся в качестве буфера использовать ТБАБ рН-6 колонка С-18 (сепарон) (коэффициент извлечения ТБАБ-ом???) поделитесь соображениями поэтому поводу |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
14.08.2009 // 19:02:25
Имхо пулей вылетать должна, даже несмотря на модификацию колонки ТБАБ-ом . Начните с прокола чистой аскорбиновой кислоты. Некоторые проблемы могут быть при извлечении , я бы использовал концентрирующий патрон с анионобменными свойствами. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
14.08.2009 // 20:13:39
DSP007 прав - ЭДТА не помешает. ИМХО: Зря Вы сразу связались с ИПХ (ТБАБ), если опыта работы в этом режиме мало или нет, то можете долго провозиться, а если ТБАБ недостаточной чистоты... тем более. Только вот удержать (более менее) и получить более менее симметричный пик АК в варианте ОФ ВЭЖХ можно не на любом сорбенте Sil C18 (пробуйте). Хорошо, если сорбент (С18) будет +AQ (с полярным эндкеппингом и т.д. ... ). Если есть под рукой Sil C30 - смело берите его. Насчет экстракции - посмотрите литературу. Я бы навскидку сделал так: навеска X mg + 3*n ml 0.05M oxalic acid + 0.001M EDTA => US bath (5min.). Затем нужно смотреть - центрифугирование или концентрирование и очистка на ионообменнике (ТФЭ) |
||
|
Jktym Пользователь Ранг: 15 |
17.08.2009 // 20:13:44
Редактировано 2 раз(а) Стандарт АК на С18 с использованием ТБАБ выходит на 3 минуте, в экстрактах листьев и плодов (тем же ТБАБ с ЭДТА и метафосфорной) после центрифугирования АК на том же месте, примеси практически не мешают. Но кажется не очень хорошо сорбенту, через 50-70 анализов не смогли избавиться от высокого давления, пробовали мыть ацетонитрил:вода, вода, ацетонитрил. Можно ли реанимировать колонку. Какие мнения будут о использовании цетил-триэтил-аммониия бромида. Так ли сложно работать с ИПХ? Поделитесь. |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
18.08.2009 // 10:26:11
Редактировано 1 раз(а) ТБАБ желательно перекристаллизовать из этилацетата. И предпочтительнее не бромид а гидросульфат или гидрофосфат . ЦТАБ увеличит время выхода целевого вещества, но концентрация его должна быть много меньше (на порядок) чем у ТБАБ. Ну и естественно, чем длиннее алифатическая цепь у ион-парного реагента, тем сложнее , а иногда просто невозможно вернуть колоночный сорбент в первоначальное состояние. Проблема с давлением может быть связана с плохонькой фильтрацией экстрактов из растительных объектов. Поэтому прежде чем делать грандиозные выводы о "смерти" сорбента я бы разобрал !!! аккуратно!!!! верхушку колонки и почистил бы входной фильтр в УЗ баньке, а заодно проверил бы подводы к колонке. Если стоит предколонка, то скорее забилась именно она или ее фильтр. Если же начал сорбент разрушаться, - и это стало причиной высокого давления, то восстановить колонку шансов нет. А насчет других методологий ВЭЖХ аскорбинки, то вот-с есть у меня Н-ное количество: Вещество : D-изоаскорбиновая кислота Колонка : Radial Pak C18 Подвижная фаза : 0,04M ацетатный буфер с 0,001M гексилсульфонат натрия - метанол (85 : 15) Литература : JCHR,1982,245,3,355 Вещество : Аскорбиновая кислота Колонка : Supelcosil LC-8-DB Подвижная фаза : Метанол - 4,3 mM гексилсульфонат натрия c 0,1%триэтиламин pH2,8 H3PO4 = 15-85 Вещество : Аскорбиновая кислота Колонка : Supelcosil LC-18-DB Подвижная фаза : 1% уксусная кислота с 1 mM тетрабутиламмония гидрофосфат pH 2,8 градиент 0мин-13% Ацетонитрил; 1,25мин - 20% Ацетонитрил; 5,0-5,5 мин-35% Ацетонитрил Вещество : Аскорбиновая кислота Колонка : LiChrosorb NH2 Подвижная фаза : 0,005M KH2PO4 pH 4,5 - Ацетонитрил = 25 - 75 Литература : JCHR,1980,196,1,163 Вещество : Аскорбиновая кислота (Витамин С) Колонка : Nucleosil C18 Подвижная фаза : 0.05M KH2PO4 pH = 2.8 Вещество : Аскорбиновая кислота Колонка : ProntoSil 120-3-C18 AQ Подвижная фаза : A : 50mM H3PO4 : B : Ацетонитрил, градиент 0-30% B в 13мин Литература : Bischoff Chromatography Ну а детектирование от 230 до 262 нм, в разных методологиях. В фармацевтике в основном использовал ИПХ, как самый приемлемый вид ВЭЖХ для наших объектов и особых проблем не имел. Не понимаю, почему, ею в основном пугают. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
18.08.2009 // 11:09:23
Garry ИМХО, испортит он колонку окончательно разборкой. Да и фиг с ней. Они так и так ее угробили уже "метафосфорной кислотой" (интересно, где взял? ). Да и пробу непонятно- фильтровали, али нет?
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 26
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
