| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
LC-MS стеролов >>>
|
 |
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
 16.03.2010 // 14:18:53
Работаем по теме, так что "чем дальше в лес, тем толще партизаны" -  . Коллеги, никто для дериватизации кето-стеролов не пользовался Girard P or Girard T реагентами? У нас с ними проблема. В более -менее стандартных (по литературе) условиях (типа, 70% спирт в 1% уксусе; 50 - 70 С (пробовали в этом диапазоне) 12 часов; 1000х избыток реагента; концентрация субстрата 10 микромоль/литре) остается до 30% интактного стерола и простая оптимизация (по температуре, спирту, времени) ничего вобщем не дала. В чем здесь может быть дело? В литературе проблемой выхода как то не заморачивались, типа видели продукт и ладно и обсуждения вопроца нет. Но мне не понятно почему там вообще остается интактный стерол? Мы думали, как бы вода мешает (все таки там равновесие), но работа в "безводной" системе (кислота в спирте без воды) выход только ухудшила. Мы новички в этом деле, так что буду очень признателен за любые советы. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
16.03.2010 // 20:12:25
Редактировано 1 раз(а) Я бы попробовал поиграть с уксусной кислотой (в сторону уменьшения), точнее с рН. И еще я бы попробовал вместо этанола - метанол или изопропанол и ацетат аммония с раскруткой рН (интуитивно). Думается, если не поможет и если никто опытом не ответит, тогда надо аналит назвать или реакционный центр и окружение описать и сам дериватизирующий агент - здесь синтетики ошиваются. |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
16.03.2010 // 21:10:51
Редактировано 1 раз(а) Детали: методику ставили по экдизону (доступен и относительно дешев): en.wikipedia.org/wiki/Ecdysone Реагенты Girard T and Girard P: а Girard P такой же, только с пиридином Уменьшить кислоту попробуем, но вообще то это катализатор, каk то уменьшать его ..counter-intuitive |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
16.03.2010 // 22:43:08
Хотел добавить. Попробуйте так же заменить АА на FA. |
|||||
|
trozen Пользователь Ранг: 216 |
16.03.2010 // 23:29:33
я работал с р-вом Жирара Т раствор готовил так: 18 мл метанола + 2 мл ледяной уксусной кислоты, потом туда 1 грамм реактива Жирара модельным стероидом был дегидроэпиандростерон 60 градусов, 30 мин, выход был практически 100% реакционной смеси брал 1 мл на 5 мкг стероида |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
17.03.2010 // 1:45:18
Т.е. все делается без воды, просто в метаноле, так? Спасибо! |
|||||
|
trozen Пользователь Ранг: 216 |
17.03.2010 // 7:50:46
да, правда я потом потом добавлял карбонатный буфер для нейтрализации кислоты и экстрагировал непрореагировавшее эфиром, т.к. у меня стояла обратная задача - максимально полно избавиться от кетостероидов и оставить стероиды с одними гидроксилами |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
17.03.2010 // 9:57:34
Редактировано 1 раз(а) понятно - и в экстракте уже кетостеролов не было? Т.е. логика в том что не экстрагироваться кетостероиды не могли, в экстракте их не было и следовательно выход был близкий к количественному? А производные оставались в "водной" фазе? Мне как раз производные нужны для масс спека |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
17.03.2010 // 15:26:07
Редактировано 1 раз(а) Я пользовался. Из двух реактивов наилучшим для наших целей оказался Girard-P (из-за более приличной фрагментации). Реакцию довольно тщательно оптимизировали, в результате пришли к следующему раствору реактива: 30 мг/мл в 50/50/0.1 ацетонитрил/метанол/трифторуксусная кислота. К сухому остатку после испарения ж/ж экстракта добавляли 100 мкл этого раствора и выдерживали 15 мин при комнатной температуре. После чего можно рзбавлять водой с бикарбонатом и закалывать, но если нужно добиться высокой чувствительности, стоит использовать ТФЭ, либо on-line, либо в 96-well формате, чтобы избавиться от избытка реагента. Но во многих случаях гидроксиламина вполне достаточно для получения требуемой чувствительности... |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
17.03.2010 // 16:32:29
Trozen, Islander Огромное спасибо! - будем пробовать. ТФЭ вроде как не проблема, мы отладили clean-up реакц смеси так как сейчас пользуем 0.5 мм колонку, но потом я хочу уйти на 75 мкм и там грязи лучше иметь по-минимуму. Пользуясь вашей любезностью, хотел бы спросить вдогонку: по вашему опыту, зависит ли выход от положения кето-группы? Может, только в экдизоне (ну и его "родственниках") кето группа стерически закрыта, к тому же она сопряжена с двойной связью - не могу понять, это сопряжение - чисто теоретически - хорошо или плохо для реакции Еще раз спасибо! |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 26
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
