| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Methylene blue >>>
|
 |
| Автор | Тема: Methylene blue | ||
|
Puzir Пользователь Ранг: 45 |
 17.03.2005 // 22:25:01
Редактировано 1 раз(а) ПРОБЛЕМА- очень (почти необратимoe) сильное удерживание метиленого голубого. Условия: 15 cm * 3mm C18; подвиж. фаза - 75% MeOH, ацетатный буфер- 5 mM pH 5. Добавление ион парного реагента (NaClO4 or sodium octanesulphonate) ничего не меняет. Буду всем благодорен за советы. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
18.03.2005 // 9:55:32
На неэндкепированной колонке этот краситель довольно прочно цепляется на немодифицированные участки силикагеля. В этом случае есть смысл взять более качественную колонку или динамическим модифицированием закрыть активные участки сорбента, добавив в элюент, например, соль цетилтриметиламмония. Причем нужно добавлять достаточно много (больше ККМ для данного состава элюента и рН), чтобы попасть в мицеллярный режим. В нем и концентрацию ацетонитрила можно снизить раза в 3-4. Посоветовать что то более конкретное сложно, поскольку исходной информации маловато. |
||
|
Puzir Пользователь Ранг: 45 |
18.03.2005 // 10:18:20
Понял. Спасибо. |
||
|
Puzir Пользователь Ранг: 45 |
18.03.2005 // 13:20:16
Что суть в остаточных силанольных групах - это 100 проц. К СОЖАЛЕНИЮ добавка 20 mM tetradecyltrimethylammonium bromide ничего неиэменила - краситель не элюируется. Колонок с endcaped C18 не имею. Но есть амино и нитрил фазы. Может у кого есть какие предложения etc. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
18.03.2005 // 14:10:20
Редактировано 1 раз(а) Можно попробовать добавить в элюент с 1% триметиламина и поиграться с рН, регулируя его фосфорной кислотой от 3 до 6,5. А увеличить содержание катионогенного ПАВ до 0,1 М не пробовали? Лучше сделать эксперимент на ТСХ, чтобы не гробить колонку. Подобрать элюент на водной основе, чтобы не раплывалось пятно красителя, а потом пробовать на колонке. Только, боюсь, более-менее приемлемые результаты будут в щелочной области, в которой на колонке работать не рекомендуется. |
||
|
Puzir Пользователь Ранг: 45 |
18.03.2005 // 15:04:02
Редактировано 2 раз(а)
|
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
18.03.2005 // 21:40:06
Редактировано 1 раз(а) Предлагаю взять нитрильную колонку, подвижную фазу ацетонитрил (80-95%) вода (5-15%) трифторуксусная кислота (0.01%-0.1%). Если удерживание слишком сильное, увеличьте содержание воды и/или ТФУК в подвижной фазе или добавьте 5-10% метанола. Для формы пика может также помочь добавка формата аммония, 1-2 мМ, не больше. То же самое можно сделать и на Вашей С18, большой разницы быть не должно. Закалывать 10-20 мкл, не более, в ацетонитриле либо подвижной фазе (если не микроколонка!). |
||
|
Puzir Пользователь Ранг: 45 |
19.03.2005 // 11:35:39
___________________________________________________ А в чем суть ТФУК? Подавление диссоциации силанольных груп? Странно то, что на этой (C18)колонке мой предшественник без проблем определял катионный комплекс Fe(II) c 1,10-phenanthroline. Добавка 50-100 mM NaClO4 к стандартной подвижной фазе (CH3CN-H2O, acetate buffer, pH 5) позволила значительно ослабить удерживание и улучшить форму пика. ВЕДЬ methylene blue довольно схожий с вышеупомянутом комплексом. |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
19.03.2005 // 14:52:52
Редактировано 1 раз(а) С одной стороны, это, а с другой стороны, образование нейтральных и малополярных ионных пар в растворе. Таким образом, удерживание будет происходить за счет взаимодействий с полярными группами неподвижной фазы (силанолы, СN и адсорбированная в порах вода). Чем больше ТФУК, воды или соли (осторожно, растворимость соли при таком содержании ацетонитрила очень мала) в подвижной фазе, тем меньше удерживание. Проверено неоднократно на многих аминах и некоторых четвертичных аммониевых основаниях, чаще всего мы это делаем на немодифицированном силикагеле, но CN и неэндкепированный С18 тоже должны работать. Обращенно-фазовым механизмом здесь и не пахнет, форма пиков намного лучше. |
||
|
Puzir Пользователь Ранг: 45 |
19.03.2005 // 16:38:09
А ВМЕСТО ТФУК есть какие либо алтернативы? HClO4? H3PO4? |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
19.03.2005 // 18:01:45
В данном случае, почти нет. Пентафторпропионовая или гептафтормасляная должны, по идее, тоже сработать. Упомянутые Вами кислоты нейтральных ионных пар с аминами в ацетонитрильных растворах, если не ошибаюсь, не образуют, поэтому вряд-ли подойдут. Алкилсульфокислоты я не пробовал, мой детектор не позволяет. С каким-то амином я пробовал играть с моно-, ди- и трихлоруксусными кислотами, можете попробовать последнюю, хотя эффект менее выражен по сравнению с ТФУК. Работал я также с относительно высокими концентрациями (1-5%) муравьиной кислоты, там механизм другой, ионообменный (на адсорбированной муравьиной кислоте), с увеличением концентрации к-ты удерживание растет, добавление воды или метанола приводит к уменьшению удерживания. Можете попробовать и этот вариант, начните с 1% муравьиной кислоты, 20% метанола и 10% воды в ацетонитриле. Общее правило в этих системах - чем меньше воды и метанола, тем сильнее удерживание. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 30
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
