| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение сахаров и кислот на ГЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение сахаров и кислот на ГЖХ | ||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
 11.03.2010 // 19:36:12
Здравствуйте, коллеги! Возникла новая задача определения смеси кислот, предположительно C1-C5, максимум C6, с различными функциональными группами (-OH, -CHO, -COOH, -C=C-). Для установления механизмов реакций. Есть прибор GC-MS. (сам я больше с ВЭЖХ сталкивался) Подсказали колонку для этих целей с сорбентом FFAP. Кто сталкивался с таким, подскажите: -какой набор кислот можно посмотреть на данной колонке? -можно ли там же смотреть сахара? (или проблема сахаров в нелетучести) Какие еще есть хорошие методы для решения данной задачи? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
11.03.2010 // 21:03:07
Редактировано 1 раз(а) Дериватизация.DB-5ms.ГХ-МС (EI,Q) В первом приближении... Далее необходимо уточнять вопрос. |
||
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1330 |
12.03.2010 // 2:45:37
Редактировано 1 раз(а) -какой набор кислот можно посмотреть на данной колонке? -можно ли там же смотреть сахара? (или проблема сахаров в нелетучести) Одновременно определять ГЖХ кислоты цикла Крепса и углеводы не удается. Чтобы повысить летучесть углеводы нужно исчерпывающе метилировать, или ацетилировать, или силилировать. В любом случае - это использование короткой колонки при 300-350С. При этом нужно определиться какие углеводы нужно определить, - не все производные можно при этих условиях разделить. Что касается определения ГЖХ оксикислот, то здесь однозначно анализ через исчерпывающее метилирование или силилирование. |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
12.03.2010 // 10:46:35
Редактировано 2 раз(а) И не сорбент, а нанесенная фаза.. На FFAP или WAX делают свободные кислоты - гомологи муравьиной; там еще могут быть CHO и C=C , но никак не ОН и СOOH. Последние - тольк с дериватизацией. Дериватизованные производные можно, в принципе, на чем угодно. Но традиционно ацетилированные сахара, например, делают на колонке с 70% цианопропила типа BPX70. Мне кажется, что при отсутствии ВЭЖХ-МС (это как раз для него задача!), лучше использовать ГХ (ПИД, МС) и ВЭЖХ (УФ) одновременно минус на минус авось даст плюс. "Авось" - потому что речь-то не о методике, а об исследовании, причем не слабом.. |
||
|
Дмитрий (anchem.ru) Администратор Модератор форума Ранг: 4450 |
12.03.2010 // 12:12:08
Редактировано 3 раз(а) Если речь про анализ неизвестных производных кислот, учитываейте что можеет получить непредсказуемый результат на неопробированных соединениях. Хотя условие до 6 атомов сужает границы поиска. FFAP - правильный выбор при прямой работе с аналитами (без дериватизации). Что-то увидите но многое и не выйдет, как правильно было указано выше. Почитайте про метод ввода on-column. Задумайтесь о возможных артефактах (появлении на хроматограмме пиков, которых не было в исходной смеси, например от терморазложение, допреакций при вводе). Задумайтесь об ожидаемых концентрациях и разбавлении до 10-8 г на компонент во вводе. В общем настоятельно рекомендую ознакомиться прежде с литературой по ГХ и ГХ/МС прежде чем приступать к такой нетривиальной задаче. Также рекомендую выполнить хотя бы минимальный поиск литературы по определению на ГХ и ГХ/МС ожидаемых кислотных классов. Благо сейчас это сделать не проблема, и статей после 96 года вполне будет достаточно. И сразу станет понятно и про методы дериватизации и про возможности. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
12.03.2010 // 13:08:11
На WAX c идеальными элюентами не делают (попробуйте, тогда поймете почему), и почему никак не -ОН (молочная кислота, например). И чем здесь поможет ВЭЖХ-УФ, без стандартов? Насчет ВЭЖХ-МС - многое зависит от МС, плюс "гидрофильная" хроматография или что-то в этом духе, хотя это можно "обойти" дериватизацией, в общем, целая история... не факт, что со счастливым концом. to drynn: "Gas Chromatography and Mass Spectrometry A Practical Guide" Kitson F.G., Larsen B.S. - добавьте в список искомой литературы. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
12.03.2010 // 13:43:49
Редактировано 1 раз(а) Всем спасибо за ответы. По теме: Определение сахаров, это скорее "факультативная" задачи. А первоочередная - это определение неизвестных кислот в водной смеси (где-то до C6) БЕЗ ДЕРИВАТИЗАЦИИ. Под дериватизацию "тупо" нет рук (( Как это сделать оптимальнее с помощью ГХ-МС ? Но -OH и даже -COOH там могут быть с очень большой вероятностью Еще есть ВЭЖХ, но не ВЖЭХ-МС ((( |
||
|
drynn Пользователь Ранг: 26 |
12.03.2010 // 14:19:59
Вот например так. В моем случае пройдет? Или не факт, что все кислоты прометилируются? Я ожидаю 1,2,максимум 3-х основные кислоты от С1 до С6. Дополнительно с разными функциональными группами. Для увеличения концентрации кислот в смеси супернатант упаривали досуха под вакуумом на роторном испарителе при температуре 40-45°С. Из предварительных исследований известно, что в исследуемой культуральной жидкости содержатся как летучие, так и нелетучие кислоты, поэтому перед концентрированием исследуемую жидкость необходимо подщелочить 0,1 н NaОН до рН 9,2 для перевода кислот в соли. Так как методом ГЖХ можно определить только летучие соединения, то задачей является перевод солей органических кислот в летучие метиловые эфиры этих кислот. Осадок растворяли в бидистиллированной воде, метилирование проводили избытком метанола в присутствии серной кислоты в течение 30 мин при 60°С. Экстракцию эфиров осуществляли хлороформом. Газожидкостную хроматографию проводили при следующих условиях. Использовали газовый хроматограф Hewlett Packard 4890 D с пламенно-ионизационным детектором. Применяли кварцевую колонку HP/NNOWAX длиной 30 м и внутренним диаметром 0,32 мм. В качестве неподвижная фазы использовали модифицированный полиэтиленгликоль (толщина 0,5 мкм), в качестве газа-носителя – гелий, скорость потока которого равна 21 см3/с. Температура испарителя – 250°С, температура детектора – 250°С. Анализ проводился в режиме температурного градиента от 50 до 200°С. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
12.03.2010 // 17:06:58
Чего?  Самое распространенное заблуждение, когда считают, что чем мельче молекула, тем ее легче "найти и посчитать". Без дериватизации всякие низкоММ окси- и кетокислоты банально декарбоксилируют или отщепляют воду. |
||
|
Korvet Пользователь Ранг: 1114 |
12.03.2010 // 17:41:33
Да, так получается, но лучше все же HCl в метаноле, с серной может быть осмоление, у вас же матрица сложная поди. но помните что гидроксигруппы не прометилируются. ещё можно использовать диазометан, но также не включая ОН группы. без дериватизации не получится в любом случае. |
||
|
OldBrave VIP Member Ранг: 1330 |
12.03.2010 // 21:23:45
Редактировано 3 раз(а) Лучше, конечно, обойтись без дериватизации, советую посмотреть: Для кислот (оксикислот) и большинства простых углеводов времена выхода для стандартных условий известны. Полимеры и высшие углеводы осадить 60-70% EtOH, упариванием на роторе можно сконцентрировать в 20-100 раз до содержания >0,1 мг/мл и делить. Для дериватизации советую посмотреть: Fluorescent Labels for the Analysis of Mono- and Oligosaccharides N. V. Shilova and N. V. Bovin (e-mail: bovin{coбaчkа}carb.siobc.ras.ru) Russian Journal of Bioorganic Chemistry, Vol. 29, No. 4, 2003, pp. 309–324. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
