Форумы ANCHEM.RU: ТФЭ - ВЭЖХ деоксирибонуклеозида

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ТФЭ - ВЭЖХ деоксирибонуклеозида >>>

  Ответов в этой теме: 32
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

12.05.2010 // 22:19:31

OldBrave пишет:
Минусы при работе с силикагелем - длительность установления равновесия в системе при работе с растворами солей, речь идет о насыщении фазы солями. Этот процесс может занимать несколько часов, может даже ночь. Неполное установление равновесия ведет к нестабильным временам удерживания. Особенно это проявляется при использовании градиента.
Кроме того, силикагель плохо себя чувствует при рН > 8, - уносится элюентом. Для аналитической колонки это означает малый срок эксплуатации.
Для решения этой конкретной задачи, возможно, HILIC - не самый лучший вариант, однако при рН > 8 все может быть.

Можно порекомендовать еще HILIC на Sil, в качестве элюента MeCN 70-80% + 50-100mM CH3COONH4 (pH=4-5), 0,1% АсОН, 0,1%HCOOH и т.д.

Да, при рН>7 гидролиз (откуда Вы взяли уже рН>8), только вот интенсивность его зависит от многих параметров.

Силикагель уносится? Насыщение фазы солями?

А кто сказал, что нужен градиент? И зачем упираться в "соли"?

Вы работали с даным аналитом в HILIC? Почему именно рН>8?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

12.05.2010 // 23:21:41

Редактировано 1 раз(а)

virtu пишет:

Можно порекомендовать еще HILIC на Sil, в качестве элюента MeCN 70-80% + 50-100mM CH3COONH4 (pH=4-5), 0,1% АсОН, 0,1%HCOOH и т.д.
Силикагель уносится? Насыщение фазы солями?
А кто сказал, что нужен градиент? И зачем упираться в "соли"?
Вы работали с даным аналитом в HILIC? Почему именно рН>8?
Уважаемый virtu, с данным аналитом в HILIC я не работал, а если бы это было, указал бы конкретные условия разделения.
Остальные ваши вопросы вынесите отдельно на форум, обсудим.

albert
Пользователь
Ранг: 440

13.05.2010 // 0:41:53

A-a-a! Господа, как человек который за последние два года поделил пару сотен подобных нуклеозидов на HILIC препаративно в граммовых кол-вах (возможно что и этот тоже, не помню), должен сказать, что Virtu попал почти в точку. Единственное что я бы для начала взял формиат или ацетат аммония ~10-50mM, ацетонитрила чуть побольше, а pH вообще оставил бы нативный (это последнее, что я бы стал подбирать для этих веществ).
Я, наверное, взял бы именно силикагель, а не диол, поскольку, по моему опыту, для подобных нуклеозидов большой разницы не будет, в то время как диол обычно сильно фонит (то что называют bleeding) и вообще имеет ограниченный диапазон pH, в котором он относительно стабилен. Хотя мы использовали для этих веществ и диол тоже (и еще несколько типов фаз).
Время уравновешивания силикагеля в HILIC в разы меньше чем в нормально-фазном варианте и это не проблема. Разницы во времени уравновешивания силикагеля и диола в HILIC вообще никакой.
Градиент до 3% в минуту - не вопрос, этого обычно достаточно.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

13.05.2010 // 5:19:48

albert пишет:
как человек который за последние два года поделил пару сотен подобных нуклеозидов на HILIC

А нельзя ли ссылку на публикацию, где описана схема разделения или исследование по этой (вашей) теме? Просто интересно.
У нас по этой теме тоже небольшой спор идет. Только не граммовых количеств, а наоборот- очень-очень микро.
Мне казалось, что еще -цать лет назад пришли к выводу, что вариант "полярный элюент-полярный сорбент-полярные разделяемые вещества" бесперспективен в плане разделительных возможностей. Кое-кто пытается эксплуатировать слабые ионообменные свойства силикагеля.
Потом, сдается мне, что OldBrave все же более прав, поскольку силикагель должен (просто обязан) быстрее разрушаться, будучи абсолютно незащищенным прививками. ИМХО, слетающий силикагель посерьезнее, чем слетающая прививка. Хотя, один хрен не слаще другой редьки.
Ну, а насчет градиентов. Если силикагель работает в воде, то ему уже все равно, сколько ее там- 10 или 90%. Непонятно только, за счет чего он при этом делит.

albert
Пользователь
Ранг: 440

13.05.2010 // 13:32:27

Я не видел сколько-нибудь значительного фона от силикагельных колонок в HILIC, по-моему слухи о растворении матрицы сильно преувеличены. По крайней мере, многие (если не большинство) колонок с шильдиком HILIC - непривитой силикагель (Alltima-HILIC, Luna-HILIC, Halo-HILIC, Atlantis-HILIC и проч). Некоторые хитрые производители (напр. Grace Technologies) просто перемывают обычный силикагель на ацетонитрил/вода и просят лишние 200 баксов за колонку. Я бы не сказал, что силикагельные колонки в HILIC как-то особенно быстро помирают, диол у меня помер значительно раньше (не буду называть производителя).
Serga, в интернете наверняка можно что-нибудь найти, по крайней мере реклама попадалась. Наши хроматограммы без структур, наверное, никому не интересны. Структуры - клиенские и я их показать не могу.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Электрохимический датчик для определения токсичных элементов «Модуль ЕМ-04»
«Модуль ЕМ-04» - электрохимический датчик для определения токсичных элементов в питьевой, природной и сточных водах, в пищевых продуктах и различных материалах.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

13.05.2010 // 13:55:13

OldBrave пишет:
Уважаемый virtu, с данным аналитом в HILIC я не работал, а если бы это было, указал бы конкретные условия разделения.
Остальные ваши вопросы вынесите отдельно на форум, обсудим.

Понятно... В обсуждении не вижу смысла. Спасибо.

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

13.05.2010 // 14:16:04

Я не видел сколько-нибудь значительного фона от силикагельных колонок в HILIC, по-моему слухи о растворении матрицы сильно преувеличены. Я бы не сказал, что силикагельные колонки в HILIC как-то особенно быстро помирают, диол у меня помер значительно раньше (не буду называть производителя).

Я, конечно, при рН=10-13 на Sil не работал, но ниже рН<=7 все ОК (работаю на обычном Sil без всяких + HILIC). А откуда "ветер дует" насчет растворения Sil? "Отдел маркетинга" опять озорничает? С фоном на МС (ESI) "проблем" намного меньше чем c модифицированным Sil.
Мне, если честно, непонятно, почему простой Sil должен "жить" меньше, чем модифицированный, при рН<=7-8, при рН>9 еще понимаю.

albert
Пользователь
Ранг: 440

13.05.2010 // 14:36:25

Я так понимаю, что силикагель имеет очень-очень незначительное растворение в воде. Ветер задул когда появились 3-микронники (обращёнка, кстати). Всех стали пугать, что они будут быстро растворяться. Дескать ставьте перед насосом насытительную колонку. Сейчас уже и 1.5мкм никого не удивишь, а они все никак не растворяются, ё-моё. По-моему колонки обычно раньше помирают своей естественной смертью.

Вон, Пат Сандра вообще работает с силикагелем на 99% воде. Обозвал свой метод reversed-HILIC (или pALC). И ничего. Вроде не растворяется.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1330

13.05.2010 // 15:11:11

albert пишет:
... По крайней мере, многие (если не большинство) колонок с шильдиком HILIC - непривитой силикагель (Alltima-HILIC, Luna-HILIC, Halo-HILIC, Atlantis-HILIC и проч)... Serga, в интернете наверняка можно что-нибудь найти, по крайней мере реклама попадалась. ...

Советую ознакомиться phenomenex.com/cms400min/litlib/luna/luna_hilic_broch.pdf
там же приведены условия, рекомендуемые уважаемым virtu.

virtu
VIP Member
Ранг: 2135

13.05.2010 // 16:00:08

albert пишет:
Я так понимаю, что силикагель имеет очень-очень незначительное растворение в воде. Ветер задул когда появились 3-микронники (обращёнка, кстати). Всех стали пугать, что они будут быстро растворяться. Дескать ставьте перед насосом насытительную колонку. Сейчас уже и 1.5мкм никого не удивишь, а они все никак не растворяются, ё-моё. По-моему колонки обычно раньше помирают своей естественной смертью.

Типичный "развод"

Вон, Пат Сандра вообще работает с силикагелем на 99% воде. Обозвал свой метод reversed-HILIC (или pALC). И ничего. Вроде не растворяется.

Да... reversed-HILIC - сильно

Пробежал одну статью Пата с Жоржем (JOC А 2009), про pALC (для пиридина и Halo HILIC):
Less than 10% of the sample retention is accounted for by the high density hydrophobic siloxane groups. The retention of pyridine is essentially controlled by some active adsorption sites that are present on the silica surface with a very low density, and which could be attributed to hydrophobic silica micropores, which adsorb pyridine molecule.

In the purely HILIC mode (high acetonitrile concentration), these active sites become inactive since they are filled up with acetonitrile molecules, which are in large excess and prevent hydrophobic interactions between silica and pyridine. The retention of pyridine is then controlled by its adsorption onto single silanol groups (75%) and by interaction with geminal and/or vicinal hydroxyl groups (25%).

З.Ы.: Заканчиваю ОФФТОП


Ответов в этой теме: 32 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты