Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Газохроматографическое определение фитостеринов >>>

  Ответов в этой теме: 32
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»
[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Газохроматографическое определение фитостеринов
virosphere2002
Пользователь
Ранг: 7

 		05.08.2014 // 8:43:38     
Уважаемые специалисты! Помогите разобраться в определении фитостеринов при помощи метода газовой хроматографии.
Первая проблема это силилирование. Для дериватизации мы используем смесь гексаметилдисилаза (HMDS) и триметилхлорсилана (TMCS) в безводном пиридине (3:1:9). Раствор этих веществ после добавления его к сухой навеске бетулина мутнеет. После центрифугирования и вкалывания надосадочной жидкости на хроматограмме виден один пик, растворителя.
ANCHEM.RU
 Администрация
Ранг: 246
lostbyte
Пользователь
Ранг: 166
05.08.2014 // 14:40:58     
virosphere2002 пишет:
Для дериватизации мы используем смесь гексаметилдисилаза (HMDS) и триметилхлорсилана (TMCS) в безводном пиридине (3:1:9).

1. В чем причина использования HMDS-это достаточно "слабый" реагент. Добавка TMCS его, конечно, активирует, но все равно. Вы по какой-то методике работаете?
2. Время проведения реакции? Нагрев?
3. Точно ли все сухое? TMS реагенты и производные гидролизуются в лёт. Осадок может быть, конечно, результатом образования пиридиновых солей, но его обычно не сказать что б уж так много. Не идет ли силоксанизация?
4. Очень странно, что видите только растворитель (вы, кстати, под ним что подразумеваете-пиридин?): неужели никаких следов реагентов нет? Хотя бы HDMSO?
Serga
Пользователь
Ранг: 1806
06.08.2014 // 14:20:42     
virosphere2002 пишет:
После центрифугирования и вкалывания надосадочной жидкости на хроматограмме виден один пик, растворителя.
Ну так греть колонку надо, и прилично. И испаритель- тоже. Выходит оно не сразу, сидит долго (даже при 290 С), несмотря на силилирование. "Бетулин" дает кучу пиков в районе 40 мин хроматограммы, если градиент температуры был 10-20 С/мин.
То что Sylon HTP мутнеет- это нормально. Силилирует оно неплохо, можно даже не греть (если лень ), а вот "порошок" бетулина силилировать не стоит, лучше раствор в пиридине, да развести посильнее. Грязь и примеси в Силоне не мешают (даже если туда лазали студенты шприцами), но как вы ухитряетесь видеть "только пик растворителя" (когда там целая уйма пиков должна присутствовать)- это вопрос.
virosphere2002
Пользователь
Ранг: 7
07.08.2014 // 14:11:29     
1. В чем причина использования HMDS-это достаточно "слабый" реагент. Добавка TMCS его, конечно, активирует, но все равно. Вы по какой-то методике работаете?
2. Время проведения реакции? Нагрев?
3. Точно ли все сухое? TMS реагенты и производные гидролизуются в лёт. Осадок может быть, конечно, результатом образования пиридиновых солей, но его обычно не сказать что б уж так много. Не идет ли силоксанизация?
4. Очень странно, что видите только растворитель (вы, кстати, под ним что подразумеваете-пиридин?): неужели никаких следов реагентов нет? Хотя бы HDMSO?

1. Используем HMDS потому что он есть. Я заказал BSTFA но когда он придет. По методике все просто. В пробирку с сухим веществом добавляем пириди и смесь силанов (пластиковая пробирка типа эппендорф с крышкой). Закрываем крышку и держим на водяной бане 70 °С в течении 20-30 минут. Потом центрифугируем муть и из верхней прозрачной части вкалываем.
2. Вермя 20-30 минут. 70 С.
3. Боюсь прослыть невеждой, но не знаю что такое силоксанизация.
4. Ну так как пиридина больше всего его и считаю растворителем. Нет, только один пик на 4 минуты.
lostbyte
Пользователь
Ранг: 166
07.08.2014 // 14:50:15     
virosphere2002 пишет:

1. Используем HMDS потому что он есть. Я заказал BSTFA но когда он придет. По методике все просто. В пробирку с сухим веществом добавляем пириди и смесь силанов (пластиковая пробирка типа эппендорф с крышкой). Закрываем крышку и держим на водяной бане 70 °С в течении 20-30 минут. Потом центрифугируем муть и из верхней прозрачной части вкалываем.
2. Вермя 20-30 минут. 70 С.

Этого должно хватить вполне.

virosphere2002 пишет:

3. Боюсь прослыть невеждой, но не знаю что такое силоксанизация.

В присутствии влаги реагенты и производные могут превращаться в силоксаны: простейший пример гексаметилдисилоксан (HDMSO)/

virosphere2002 пишет:

Нет, только один пик на 4 минуты.

Хроматографический режим какой? Отдельно свою смесь для силилирования не прокалывали? А то может HMDS уже не HMDS?
Serga
Пользователь
Ранг: 1806
07.08.2014 // 20:26:25     
virosphere2002 пишет:
Используем HMDS потому что он есть. Я заказал BSTFA
А бесполезно все.
Ваши проблемы не в модификации, а в бестолковой хроматографии. Там и ищите веревки.
Каталог ANCHEM.RU
 Администрация
Ранг: 246
Журнал Заводская лаборатория. Диагностика материалов Журнал Заводская лаборатория. Диагностика материалов
Eжемесячный научно-технический журнал по аналитической химии, физическим, механическим и математическим методам исследования и сертификации веществ и материалов. Основан в январе 1932 г.
Тимми
Пользователь
Ранг: 11
07.08.2014 // 20:43:26     
virosphere2002 пишет:
Уважаемые специалисты! Помогите разобраться в определении фитостеринов при помощи метода газовой хроматографии.
Первая проблема это силилирование. Для дериватизации мы используем смесь гексаметилдисилаза (HMDS) и триметилхлорсилана (TMCS) в безводном пиридине (3:1:9). Раствор этих веществ после добавления его к сухой навеске бетулина мутнеет. После центрифугирования и вкалывания надосадочной жидкости на хроматограмме виден один пик, растворителя.

У нас в лаборатории фитостерины определяют так: кипятят пробу (содержащую жир) с раствором щёлочи, дают остыть, добавляют гексан, отмывают щёлочь и образующееся мыло водой в делительной воронке до нейтр. реакции, неомыляемые липиды (в т.ч. стерины) экстрагируются гексаном, гексановый экстракт упаривают до небольшого объема 1-2 мл и закалывают в ГХ. Никакого силилирования не надо, все стерины выходят прекрасно, как на ПИД, так и на МСД. Бетулин не делали, но разницы нет думаю. Важно: температура высокая, если надо уточню, порядка 290-300 градусов, и то стерины при этом выходят от 30 до 40 минут. Колонка 30 метров HP-5-MS (метилфенилсилоксан). 1 мл/мин гелий.
Тимми
Пользователь
Ранг: 11
07.08.2014 // 20:47:37     

2. Вермя 20-30 минут. 70 С.

20-30 мин на 70С - надо погорячее гораздо и дольше по времени ждать.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302
08.08.2014 // 0:01:26     
Serga прав: стеринам нужна высокая температура, обычно это изотерма, 300 градусов для колонки и испарителя, 310 -- детектора.
fritz-85
Пользователь
Ранг: 4
08.08.2014 // 11:35:18     
Редактировано 1 раз(а)


Хроматографический режим какой? Отдельно свою смесь для силилирования не прокалывали? А то может HMDS уже не HMDS?
хроматографический режим:
Колонка 275 С
Испаритель 280 С
Детектор 280 С

также пробовали колонку греть до 300 С, испаритель и детектор тоже ставили 300 С

1,5 мл/мин гелий

отдельно смесь кололи, получился 1 пик на 4,5 мин.
lostbyte
Пользователь
Ранг: 166
08.08.2014 // 11:55:02     
fritz-85 пишет:
отдельно смесь кололи, получился 1 пик на 4,5 мин.

Смесь в том же режиме кололи? Тогда может не делится просто. Если же кололи при более низкой температуре, то компоненты должны отделяться.

  Ответов в этой теме: 32
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

Ответ на тему

ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»
Размещение рекламы / Контакты