Форумы ANCHEM.RU: определение фосфомицина HPLC

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

определение фосфомицина HPLC >>>

  Ответов в этой теме: 31
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

07.04.2005 // 16:09:28

И еще может быть ход - если аминофаза была силикагельная, то взять полимерную, или наоборот.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

podlodka
Пользователь
Ранг: 32

07.04.2005 // 16:27:34

Виноват, имел в виду цис-пропенилфосфоновую:
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=1368198
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=10049860
примесь транс-продукта никак исключить нельзя.

Понятно, но у нас не просто биологическая конверсия а читый биосинтез в обычной питательной среде, более подробно сказать не могу, т.к сама этим не занимаюсь. Поговорив с людьми которые этим занимаются мне сказали что у них другой процесс и синтезируется избирательно один изомер. Есть у нас один знаток ТСХ, так вот он мне сказал, что на силикагеле он изомеры разделить может. Проверял сам и заверил меня что в КЖ только один изомер.
А методикой соосаждения заинтересовался.

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

07.04.2005 // 16:29:01

podlodka пишет:
Мы тут уже месяц бьемся над проблемой определения гентамицина в плазме крови. Кучу патронов перевели, но попадая на патрон гентамицин там и остается. Чем только мы его снять не пытались, все бесполезно. Пробовали белки просто осадить (без патрона) ТХУ, солями, органикой... Получаем прозрачный раствор, добавляем в него чистый гентамицин - он бесследно исчезает. В стандарте все отлично - есть. Может что посоветуете?

На мой взгляд, надо дериватизировать в ходе экстракции по аминогруппам. И в УФ поглощение появится, и за карбоксилы цепляться не будет (а они в HLB есть, хотя и немного).Все уже описано, патроны те же, Oasis HLB:
www.clinchem.org/cgi/content/full/46/6/837

podlodka
Пользователь
Ранг: 32

07.04.2005 // 16:31:21

КонстантинС пишет:
И еще может быть ход - если аминофаза была силикагельная, то взять полимерную, или наоборот.

У нас аминофаза силикагельная. Полимерной, к сожалению нет.

podlodka
Пользователь
Ранг: 32

07.04.2005 // 16:36:55

Редактировано 1 раз(а)

Все уже описано, патроны те же, Oasis HLB:
www.clinchem.org/cgi/content/full/46/6/837

Мы по этой статье и работаем. Уж кто ее писал, но ничего не сходится :о( Вы на рН трис буфера посмотрите (10 и 12) - такие в природе существуют? во всех справочниках максимум 9 сделать можно!

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Ротационый испаритель UL-2000
Предназначены для проведения процессов, сопряженных с быстрым удалением растворителей из растворов или суспензий органических и неорганических соединений путем испарения при нормальном и пониженном давлении и контролируемой температуре. Объем испарительных колб от 25 мл до 2 л. Скорость вращения: 20-200 об/мин. Высота подъемника: 0-150 мм.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

07.04.2005 // 17:00:23

podlodka пишет:
Если не сложно, то методику поподробнее очень хотелось бы :о)

Методика выделения с соосаждением из работ по алендронату:
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=1478982
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=2094701
К 5 мл мочи в пробирке добавляли 50 мкл 1.25М хлористого кальция, затем 50 мкл (или более, если необходимо) 1М гидроокиси натрия до образования белого осадка. Центрифугировали, отделяли осадок, растворяли в 100 мкл 1М соляной кислоты, снова осаждали 100 мкл 1М гидроокиси натрия. Отделяли осадок, растворяли в 0.8 мл 0.2М уксусной кислоты, 0.4 мл 0.01М ЭДТА и 0.4 мл 0.2М ацетата натрия. После разбавления 3мл воды сорбировали на ДЭА патроне, подготовленном 3мл воды, элюировали 1мл 0.2М цитратом натрия с 0.2М двухзамещенного фосфата натрия (рН 10.7).

podlodka
Пользователь
Ранг: 32

07.04.2005 // 17:07:47

спасибо!

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

07.04.2005 // 17:15:41

podlodka пишет:
Мы по этой статье и работаем. Уж кто ее писал, но ничего не сходится :о( Вы на рН трис буфера посмотрите (10 и 12) - такие в природе существуют? во всех справочниках максимум 9 сделать можно!

Не получается на патроне, попробуйте совместить с жидкостной экстракцией. Я бы взял динитробензоилхлорид в дихлорометане (0.5 мг/мл). Полкубика плазмы хорошо подщелочить 1М гидроокисью натрия, добавить 2мл раствора ДНБХ, трясти полчаса. Все будет дериватизировано и в органике. По идее, ДНФБ в этих условиях тоже годится, только греть надо, а ДНБХ сработает и при комнатной температуре.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

07.04.2005 // 17:19:15

podlodka пишет:

КонстантинС пишет:
И еще может быть ход - если аминофаза была силикагельная, то взять полимерную, или наоборот.
У нас аминофаза силикагельная. Полимерной, к сожалению нет.

А можно еще сделать пару ходов конем.

Во-первых, в буфер можно добавлять органического растворителя. Для начала - немного. Допустим, метанола (этанола, ацетонитрила). Мы же не знаем что за природа мешающих соединений - вдруг поможет. Может в принципе даже помочь, если соединения подобные. По вряд ли поможет, если это изомеры.

Во-вторых, есть такая штука как просто изменить температуру - поднять там, или опустить. Вот тут даже мелективность разделения изомеров должна меняться. Вот только не знаю, насколько благоприятно (или неблагоприятно) такие действия отразятся на рефрактометре...

Кроме того, если иметь в виду МС, то можно попробовать радикально изменить систему. ТОлько это куча трудов, а результат может быть никаким.
Соль (или основную ее часть) можно выбросить, а удерживание регулировать рН, а именно, уменьшать его увеличением рН.
Тут есть хитрость и минус (два в одном) - чем выше рН, тем ниже емкость фазы. рН пробы должен быть равер или больше рН элюента. И при больших концентрациях эффективность может упасть.

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

07.04.2005 // 17:23:19

КонстантинС пишет:
Во-первых, в буфер можно добавлять органического растворителя. Для начала - немного. Допустим, метанола (этанола, ацетонитрила).

Чуть не забыл! Если хотите использовать МС детектор, органику желательно добавить, хотя бы 10-20%, чувствительность заметно поднимется.


Ответов в этой теме: 31 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты