| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение маркеров аллергии? >>>
|
 |
|
kot Пользователь Ранг: 1987 |
 07.10.2014 // 6:25:48
Не совсем понятна методология и задачи,теоретически любой белок в том же молоко может вызывать условную сыпь. Белковый состав вполне себе изучен и гуглится. Другое дело все очень индивидуально, говорить о том что казеин (в некой условной ААВВ форме) аллерген можно только в пределах ограниченной "выборки" населения для которой он таковым является. В чем цель работы? Установить аллерген с максимальной выборкой? Тогда это скорее медицина а не аналитика. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
07.10.2014 // 9:30:18
Редактировано 1 раз(а) Уважаемые коллеги, благодарю за участие в дискуссии! Уважаемый коллега Andrew, мне что-то подсказывает, что 10 мкл с неизвестной матрицей - уж больно лошадиная доза для нанопоточки... Хотя, я, конечно, не исключаю, что абсолютно не прав в этом в этом вопросе, тут надо ждать гуру  Кстати, заходите к нам в гости, если будет время, расскажите хоть немного о железе, которое у Вас нынче, впечатления о нем Интересно же Очень жаль, что наша выпускница не подошла Вашей организации из-за надписи в дипломе, а не из-за фактических знаний  Ну да что ж делать, бюрократия...Уважаемый коллега virtu, большое спасибо за ссылки! Многие из них видел, но были и новые, что очень важно. Также наткнулся в гугле на диссер, почитал, приуныл немного, там все очень сложно получается, имеющиеся средства у меня все же на малые молекулы, поэтому, конечно, вероятно придется комплектоваться серьезно, если решусь на эту задачу (предварительно потратив годик на "курение" литературы и, вероятно, даже придется искать место для стажировки). Уважаемый коллега kot, безусловно, Вы правы. Я все же считаю, что если в эту тему и идти, то начинать надо поступательно - сначала надо делать уже известные вещи, чтобы понять и почувствовать их, а уж потом замахиваться на что-то большее, если вообще это будет мне по силам. В любом случае я бы хотел делать упор на аналитике. Спасибо Вам! P.S. Сейчас посмотрел апликашки разные по нанопоточке... Все же в некоторых случаях действительно аж 10 мкл вкалывают... Правда, на чистеньких стандартах... Ну да все равно, факт остается фактом... Хотя почему-то думал, что для нанопотока и объем должен быть меньше
|
||
|
kump Пользователь Ранг: 3127 |
 07.10.2014 // 14:21:04
Извиняюсь за офф-топ. Ну уж Вы сыпнули солью на больное место  Развелось всяких аккредитаций, СМК, GLP и подобной хрени... А потом вопят, что некому работать. |
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
07.10.2014 // 14:29:20
Редактировано 1 раз(а) Мне представляется, вам нужно начать с детального step-by-step плана эксперимента; какие вколы и в какие колонки в вашей ситуации пока дело десятое. Посмотрите с точки зрения аналитической химии: что вы хотите найти? в чем? как вы будете измерять активность (аллергенность)? Предположим, вы идентифицируете какой то белок как кандидат в аллергены. Как подтвердить, что это то что вы искали? Нужно ли понять, сам ли белок аллергенен (аллергология ни разу не моя область, я все таки Spectrometrist и здесь могу здорово ошибаться), или какие то модификации типа сахаров? Нужно ли понять какие именно модификации, или достаточно сказать какой это белок в принципе? Ответьте на эти вопросы и картина резко проясниться. Не обижайтесь, но пока то что вы пишете выглядит как хаотичные движения, а не целенаправленный поиск. Решите вопрос стратегически, с деталями вы понемногу разберетесь когда точно поймете чего вам обязательно надо добиться, а чем можно пренебречь. Удачи! P.S. Я заметил я стал сбиваться на нравоучения вместо конкретных советов. Наверное, это старость. Или, я слишком много пишу гранты и они вбивают в мозг "доказательное" мышление |
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
07.10.2014 // 16:52:33
Уважаемый Spectrometrist, большое спасибо Вам за ответ! Вы, как всегда, правы. Действительно, сейчас мои движения хаотичны, ибо давно уже не попадал в ситуацию, в которой я даже не представляю, с какой стороны подойти к решению задачи... В данном случае я представляю работу следующим образом: 1) Внимательно изучить литературу "для чайников", а потом перебраться на что-то близкое к теме; 2) Выбрать несколько объектов для тренировки, на которых уже подобные виды работ делались и гарантировано получались (тут со ссылками на подобные работы помог уважаемый коллега virtu и гугл ), сделать аналогичную работу для себя, посмотреть, насколько хорошо получилось. Например, можно взять в качестве таких объектов тот же арахис, молоко, хлеб, яйца;3) Изучив литературу найти те белки или гаптены, которые считаются ответственными за подобную реакцию; 4) Попробовать с помощью ферментов развалить на части, чтобы можно было детектировать с помощью QqQ (однако ведь и тут может же произойти наложение, как от него застраховаться - не очень пока что представляю... В малых молекулах я ориентируюсь на Rt, а также соотношения между MRM-переходами), фактически, делать количку; Для установления структуры придется выделять, чистить, идентифицировать (а МСВР нет, так что мимо кассы), отдавать медикам для изучения активности и взаимодействия с IgE. Вот как-то так вижу этот вопрос на текущий момент... |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
07.10.2014 // 19:35:29
Мне импонирует ваш конструктивный подход - сильно оличается от обычной реакции "не учите меня жить, лучше помогите материально" (с) Я бы начал с того что проговорил с вашими партнерами (медики? пищевики?) что они понимают под и как они меряют аллергенность? Насколько это количественно? Можно ли это поставить в рутину и, например, проскринировать 100 фракций? Если метод есть, я бы установил принадлежит ли активность белкам или нет. Это "перевал" разделющий два мира которые очень мало общаются между собой. Как это сделать - возможны варианты. Если это протеины, ваш путь скорее всего пре-фракционирование (что нибудь тупое и об'емное типа осаждения сульфатом аммония; ультрафильтрации и т.д.), потом ионообменная колонка с сбором фракций, потом контроль на акриламидном геле покажет вам как быть дальше - делить ли еще (HILIC? обратная фаза? другой ионообменник?), или идентифицировать что там есть, "привязывать" активность к найденным белкам (может, кто уже известен как аллерген?!) и подтверждать биохимией Если это НЕ белок, делить (на прямой или обратной фазе), искать активные фракции и идентифицировать компоненты. Но здесь реально без ЯМР будет трудно, разве вещество найдется в библиотеке масс спектров. Ну как-то так, но можно и нужно сокращать путь: пищевые аллергены проблема очень хорошо изученная и может удастся заменить поиск "в лоб" проверкой десятка гипотез, типа "может это А? нет, тогда Б? тоже нет и водорастворимое, тогда В?" и далее по списку" |
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
07.10.2014 // 20:31:56
Редактировано 1 раз(а) Большое спасибо Вам за совет! А насчет подхода - слезами и криками делу не поможешь Поэтому оскорблять собеседников, которые помогают, советуют - это не просто неприлично, но и глупо Сейчас как раз медиков и биохимиков пытаю, что они хотят - белки или гаптены. Если белки - то кто и как будет делать контроль по IgE (так как с ИФА не работаю, то и не держу лишнее для меня оборудование), а также что мы хотим в итоге - идентификацию нового или все же тормозим на известном. Если второе - стандарты, реагенты, реактивы, пробуем, смотрим. Первое - ЯМР снять можно, МСВР - найду Саму же аллергенность, как я понял из общения, они понимают как результат реакции (positive) на ИФА. Какое там идет количественное выражение (интенсивность окраски или что-то еще) - история пока что умалчивает, но это буду выпытывать, поскольку как уже было очень точно подмечено выше - IgE реагирует на огромное количество соединений. Пока они будут думать, что хотят - буду читать литературу, а потом и продукты питания терзать... А дальше - по описанной Вами схеме. Пока что чувствую, что несколько месяцев у меня уйдет только на изучение материалов, литературы и согласование плана работ (ибо не могу бросить остальную работу), а там - будем смотреть, что из этого получится. В любом случае, большое спасибо всем участникам дискуссии, теперь представляю, в каком направлении рыть, если потенциальные партнеры не пойдут на попятную Еще раз огромное спасибо!
|
||
|
kump Пользователь Ранг: 3127 |
07.10.2014 // 23:03:47
Редактировано 1 раз(а) Не совсем так. IgE как любое антитело вырабатывается специфично к определённому антигену (в первом приближении). Т.е. сколько, грубо говоря антигенов, столько "сортов" иммуноглобулина Е будет выработано в организме. Так, что ИФА реакция определённого антигена с определённым IgE будет строго специфичной (опускаем ньюансы). И при помощи определённого диагностикума можно специфично обнаружить опр. антиген. Особенностью же IgE, в отличие от других Ig (A,D,M) закл. в том, что он прикреплён к поверхности тучных клеток и базофилов и соединение его с антигеном вызывает цитотоксический эффект - распад клеток с высвобождением активных веществ - гистамина, серотонина, что проявляется как воспаление - аллергическая реакция. Вполне возможно испытывать антигенную активность подкожной пробой типа реакции Пирке или Манту. Вопрос в том, чего хотят Ваши медики 1) Получать чистые антигенные препараты для иммунизации и получения лечебных сывороток. 2)Имея диагностикумы в виде определённых антител, к опр антигенам, распознавать эти антигены (читай - аллергены) в различных субстратах, напр. в продуктах питания. З.Ы. Рекомендую книгу Рем Викторович Петров "Иммунология и иммуногенетика" 1976 М. "Медицина" Небольшая просто и доходчиво написаная, прочитаете на одном дыхании как хороший детектив. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
08.10.2014 // 1:30:50
Редактировано 1 раз(а) Ммм... действительно, надо узнать чего именно хотят медики (это очень сложно, как правило ), т.к. сначала молоко и пыльца, а затем медики (кровь и т.д.). Подозреваю, что им, может быть, нужна диагностика, а если это так, то решать эту задачу методом ХМС - настоящий хардкор.
|
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
08.10.2014 // 10:04:25
Уважаемый коллега kump, благодарю за наводку! Это как раз то, что нужно! Будет что почитать за кружкой чая и вечерком, кроме статей по своей теме Уважаемый коллега virtu, надеюсь, они не будут замахиваться на плазму, по-крайней мере, сразу Ибо даже при работе с малыми молекулами в плазме сталкиваюсь с такими чудесными чудесами, что при мысли о том, что там будет на тяжелых массах становится немного не по себе Это уже задачка для гуру, а не для начинающих Так что пока что буду пытаться все склонить к более простым объектам! |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 25
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
