Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Лигандно-обменная хроматография >>>

  Ответов в этой теме: 50
  Страница: 1 2 3 4 5
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Лигандно-обменная хроматография
Denischen
Пользователь
Ранг: 19

21.02.2006 // 18:45:48     
Всем доброго времени суток!
Тут такое дело: надо работу выполнить по теме лиганднообменная хроматография, если конкретнее, то разделение моносахаров, фенолов на катионнообменнике (КУ-2-8) в кальциевой форме (КУ-2-8 сополимер стирол-дивинилбензола – 3-х мерная матрица с привитыми сульфо-группами). Суть проблемы в том, что нету удерживания этих самых сахаров, фенол сидит немного, то есть выходит всё же не в мертвом объёме (вероятно из-за сродства к кольцам матрицы), а вот сахара никак. Может кто сталкивался с этой проблемой или видел где-то что-то подобное а то мы тут уже с ног (и с клавиатур) сбились в поиске...
В обсчем помогите кто чем может...
Заранее спасибо...
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


22.02.2006 // 8:19:18     
Из методички к лабораторной работе по углеводам:

Для концентрирования, идентификации и количественного определения смесей моносахаридов используют лигандный обмен на катионообменных смолах в Li+, K+, Ca2+, Ba2+, La3+, Ag+ - формах и на анионообменных смолах в боратной форме. Хроматография на катионообменных смолах в Са2+ форме становится стандартным методом определения смесей сахаров и полиолов в вине и пивном сусле. Хроматографическое разделение проводят при повышенной температуре (50-85 оС), для улучшения формы пиков. Разделение углеводов основано на различии в устойчивости комплексов полиолов и углеводов с катионом металла, связанным с ионообменной группой смолы.
Механизм разделения включает лигандный обмен: молекула полигидроксильного соединения обменивается с молекулами воды в конкуренции за противоион смолы. Сила взаимодействия связана со способностью гидроксильных групп образовывать координационные связи. Использование анионообменных смол в боратной форме связано с устойчивостью комплексов, образуемых борат- ионами и цис- гдроксигруппами, ионной силой и рН среды. Разделение происходит при 50 оС элюированием буферными растворами с увеличивающимися концентрациями бората (0,1  0,2 М).

Для концентрирования, идентификации и количественного определения удобно использовать катионит КУ-2-8 в Са2+- форме. Для этого катионит вначале переводят в Н+- форму, а затем в Са2+- форму и заполняют им колонку (10 х 150 мм).
Через катионит в Са2+- форме пропускают раствор, содержащий сумму моносахаридов (обычно берут 2- 2,5 мл экстракта). При этом происходит удерживание углеводов на сорбенте за счет образования комплексных соединений углеводов с ионами кальция различной устойчивости. Десорбция углеводов с колонки осуществляется пропусканием воды, в результате чего происходит обмен углевода на молекулы воды, в соответствии с устойчивостью комплекса «углевод- ион кальция». В процессе элюирования собирают вытекающую из колонки жидкость (элюат) порциями по 1 мл и в каждой определяют содержание углеводов (оптическую плотность) по фенолсернокислотному методу. Это дает возможность построить профиль элюции углеводов. Наблюдающиеся на нем пики углеводов можно идентифицировать по стандартным углеводам, подвергаемым хроматографическому разделению в тех же условиях (концентрация стандартных веществ в пробе 40 мкг/мл). По объему элюирования идентифицируют собственно моносахарид, а по величине пика- его концентрацию.

Сам я это, естественно, не делал.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


23.02.2006 // 22:45:02     

Эх, господа-товарищи... как говорится, стали жертвами неудачного названия.

Начнем с того, что это не адсорбционная хроматография, а ЭКСКЛЮЗИОННАЯ... это значит, что сахара НЕ УДЕРЖИВАЮТСЯ, но только каждый - в большей ли меньшей степени. Для осуществления таких разделений нужны высокоэффективные колонки, заполненные, к примеру, 7-8 микронником..

А Вы - КУ-2!!! Родные, вы что?
Denischen
Пользователь
Ранг: 19


24.02.2006 // 7:20:25     
То есть дело не в моих кривых руках. Ура, это немного поднимает мою самооценку. Но как же тогда методичка по лабораторным работам, про которую говорил Serga. Мы же по ней всё и делали. Неужели это из серии "научная фантастика"
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


24.02.2006 // 8:46:38     
Да, это не есть научная фантастика. В российских условиях многие, полагаю, делают, как описано в методичке (не сами же они ее выдумали). Механизм разделения, во всяком случае, известный. Возможно, вы не перевели смолу в активную форму (Н+), после чего только она способна перейти в более стабильную Са2+ форму. Может, поток элюента был слишком быстрый. Как вы детектировали углеводы?
На этой схеме изготавливают и колонки для ВЭЖХ.
Что касается меня, я тоже считал КУ-2-8 анахронизмом, и лично эти методы не воспроизводил (но у нас хоть система ВЭЖХ имелась). За неимением полимерных сорбентов, специально разработанных для лигандного обмена углеводов в ВЭЖХ (я имел дело с Waters, термостат которого не позволяет взгревать выше 60, а рабочая температура колонок 80-90), моносахариды делил на обычном силикагеле с привитой аминофазой. При нормально-фазовом градиенте (95%/5% MeCN/H2O- 100% H2O), DAD 195 nm(dRI тут не годится, а ELSD, как вы уже догадались, не было, да и "текущая" в таких анализах аминофаза на нем сильно шумит). Порядок выхода- моно-, ди-, три-, олиго- и полисахариды. Моно- и ди- еще можно разобрать, а остальное уже идет чохом.
Denischen
Пользователь
Ранг: 19


24.02.2006 // 12:38:07     
я понимаю конечно все дело в различной устойчивости взаимодействия металлов и лигандов но если какие-нибудь теоретические выкладки на которые операется сей способ разделения. На данный момент я сделал экстракт одного из растений с целью выделения суммы углеводов, перевел КУ-2-8 в кальциевую форму и попытаюсь разделить(идентификация фенолсернокислотным методом) если что-нибудь получится напишу.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Высокотемпературная лабораторная трубчатая  электропечь SNOL 0,2/1250 Высокотемпературная лабораторная трубчатая электропечь SNOL 0,2/1250
Электропечь SNOL 0,2/1250 предназначена для проведения химических анализов, аналитических работ и разных видов термообработки при температурах от 50 °С до 1250 °С в воздушной среде в стационарных условиях. Рабочая камера электропечи состоит из корундовой трубки с двумя заглушками.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


24.02.2006 // 16:21:42     
Послушай, просто экстракт тянет из растений все подряд- всякую органику в гликозидах и пр. пр. Вы проводите групповое выделение углеводов или как? А на стандартной смеси?
Да и какие еще теоретические обоснования нужны? Есть они, конечно. Только объяснять долго.
Denischen
Пользователь
Ранг: 19


25.02.2006 // 21:22:13     
буду благодарен если напишите как лучше тянуть(сумму углеводов)(заранее спасибо Serga за участие..) я так понимаю почитав предыдущее работы. Сумма углеводов переходит в воду с помощью ультразвук экстракции(на данный момент я это сделал затем сконцентрировал до минимального объема пока на этом все, возможно что то надо сделать по другому)??? А как стандарт построен (предыдущим поколением) график градуировачный по глюкозе. Хотя конечно как я понимаю надо бы по всем веществам предполагаемым строить отдельно...
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


26.02.2006 // 6:29:48     
Я не спец по выделению и разделению углеводов из растительного сырья, но начальный ваш этап верный (водная УЗ-экстракция). Кроме углеводов при этом тянется еще уйма гликозидов, создающих проблемы при анализах. Впрочем, я постараюсь кинуть ссылку на схему выделения углеводов.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


26.02.2006 // 16:46:25     

Не хочу показаться снобом, но большинство постов Serg-и грешат явными ошибками.
Korvet
Пользователь
Ранг: 1114


26.02.2006 // 20:59:51     
Я так думаю, что те теоретические выкладки о которых интресовался Denischen, как раз касаются возможности разделения сахаров на этом КУ-КУ-2-8. Если та же глюкоза смывается сразу в мёртвом объёме и с нею ещё все возможные сахара какой смысл делать экстракты. Если просто у системы не хватает эффективности, чего же сырьё переводить. Метод. рекомендация конечно хорошо, но на заборе тоже написано... Что интересно всякие гликозиды то может и будут немного удерживаться за счёт взаимодействия несахарной своей части со скелетом этого КУ-КУ.

  Ответов в этой теме: 50
  Страница: 1 2 3 4 5
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты