| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Гель проникающая хроматография >>>
|
 |
| Автор | Тема: Гель проникающая хроматография | |||||
|
olyamalblwka Пользователь Ранг: 41 |
 28.03.2017 // 16:19:47
Подскажите, знатоки гель -проникающей хроматографии, кто сталкивался с проблемой смещения времен удерживания? Есть ли какие-то особенности ухода за гель-колонкой? В паспорте на колонку только указаны максимально-допустимый расход , pH, возможные элюенты . |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
SergeyK Пользователь Ранг: 2168 |
28.03.2017 // 18:39:52
Какие-то есть. Каталожный номер колонки может быть назовете? |
|||||
|
olyamalblwka Пользователь Ранг: 41 |
28.03.2017 // 20:29:39
Колонка Ultrahydrogel 250, фирмы Waters |
|||||
|
SergeyK Пользователь Ранг: 2168 |
28.03.2017 // 21:32:22
Тут нет того, что нужно? https:// |
|||||
|
olyamalblwka Пользователь Ранг: 41 |
29.03.2017 // 6:20:27
Такое руководство есть, соблюдаем условия , которые там указаны. Однако про смещение времен удерживания там нет информации ((( |
|||||
|
SergeyK Пользователь Ранг: 2168 |
29.03.2017 // 8:05:40
Редактировано 2 раз(а) Тогда вам придется подробнее рассказать о своей проблеме, с хроматограммами. Лучше так: https:// |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
29.03.2017 // 8:53:17
Оля, если Вы хорошо представляете, какой принцип заложен в основу ГПХ, то должны искать причины, которые приводят к нарушению механизма ГПХ. Во-первых, в состав водных элюентов для ГПХ, если они к тому же не содержат ацетонитрила и метанола обычно добавляют в обязательном порядке консерванты типа азида натрия (0,01 %) или хлорэтанола во избежание контаминации колонок всевозможными микроорганизмами, особенно при использовании фосфатных буферов. Во-вторых, на процесс постоянства времен удерживания влияет термостатирование колонок и нормальная стабильная работа насосных систем. Так что проверьте постоянство поддержания температуры в термостате колонок и, соответственно постоянство заданного расхода элюента. В-третьих, если есть проблемы с точностью определения молекулярных масс, то обычно используют в качестве параметров калибровки так называемые относительные времена удерживания. Для этого в анализируемые растворы добавляют потоковые маркеры. Что это значит ? Например, Вы определяете молекулярную массу декстранов или ГЭКов. Для повышения точности к раствору образца и стандартных растворов, предназначенных для калибровки системы добавляют раствор глюкозы или этиленгликоля. В результате хроматографирования, Вы получите пик стандарта или пик анализируемого полимера и дополнительно пик потокового маркера. При построении калибровки заносят не времена удерживания в максимуме пика, а величину соотношения Tmax/Tpm (время удерживания в максимуме пика/времени удерживания потокового маркера). Соответственно для расчета молекулярных масс исследуемых образцов оперируют такими же отношениями времен удерживания фракций (секций) пика полимера к времени удерживания потокового маркера. Использование потокового маркера полностью компенсирует все проблемы со стабильностью потоков и температур в хроматографической системе. В-четвертых, в системах для ГПХ никогда не применяйте расходы элюента более 1 мл/мин! Большие расходы приведут к проседанию геля в колонках, увеличению мертвого объема, размыванию пиков (потеря эффективности), могут привести к образованию так называемых войдов (трещин и пустот), что непременно скажется на процессе ГПХ. В-пятых, к смещению времен удерживания может приводить процесс нарушения механизма ГПХ за счет появления адсорбционных проявлений, которые могут быть генерированы накопившимися примесями из образцов, особенно, полный состав которых Вам не ведом. В этом случае необходимо применять защитную предколонку в обязательном порядке.... Ну и периодически подвергать колонку специальной промывке например, растворами ДМСО (зависит от типа предполагаемых загрязнителей) |
|||||
|
SergeyK Пользователь Ранг: 2168 |
29.03.2017 // 9:41:27
В-шестых, всегда меняйте колонку на малом потоке насоса, и так, чтобы воздух не попадал в колонку. |
|||||
|
olyamalblwka Пользователь Ранг: 41 |
29.03.2017 // 10:38:17
Спасибо, Garry,за ваш очень информативный комментарий 😊 давайте по Вашим пунктам: мы используем раствор 0,1 М NaNO3. По поводу консервантов не слышала раньше. И в инструкции на колонку этого нет((( обязательно попробуем 2) расход проверяли,. Термостат также работает в норме. 3) по поводу маркеров - попробуем подобрать.4) расход 0.8 используем, 5) предколонка имеется, промывку водой делаем, т.К анализируем водные растворы, 6) не совсем понятна процедура замены колонки при расходе. Поясните, пожалуйста |
|||||
|
SergeyK Пользователь Ранг: 2168 |
29.03.2017 // 11:11:35
Примерно вот так: |
|||||
|
olyamalblwka Пользователь Ранг: 41 |
29.03.2017 // 12:22:12
SergeyK, спасибо. Правильно ли я поняла из данного документа, что если воздух в колонке, то надо обратным ходом промывать при маленьком расходе? |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 40
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
