Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ: количественное определение фамотидина: колонка для НФ, ПФ для ОФ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: количественное определение фамотидина: колонка для НФ, ПФ для ОФ >>>

  Ответов в этой теме: 33
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

12.09.2018 // 9:25:47

Редактировано 1 раз(а)

Помимо силанолов, которых там ничтожное в космических масштабах количество, там ещё очешуительно толстая пленка воды на силикагеле, такая, что ваших силанолов не видно ни в микроскоп, ни в телескоп, ни в театральный бинокль.
Вот в этой-то воде часть фосфорной и приютится. Просто статистически она там будет, вам вся фосфорная мира и не нужна.
А смоете вы свой амин, повышая pH, это ведь градиентный метод?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Avet
Пользователь
Ранг: 1071

12.09.2018 // 9:31:47

OldBrave пишет:

Avet пишет:
... ПФ: Раствор калия дигидрофосфата, рН 7,0 раствором NaOH – метанол, рН смеси 5,0 фосфорной кислотой. Колонка из методики: Silica LiChrosorb Si-60-7, 250 х 4,6. ... Как будет себя вести силикагель в виде "голой" поверхности при рН 5?
Силикагель в метаноле (водном метаноле) прилично растворяется, чтобы это предотвратить ПФ должна быть кислая.
В данном случае силанольные группы сорбента практически все будут "закрыты" фосфатом. Разделение/сорбция будут проходить за счет взаимодействия аминогрупп аналита с фосфатом на поверхности.
Вопрос о дальнейшем использовании колонки с другой ПФ.

Спасибо за ответ. Но механизм представить не могу: как фосфат-ион будет удерживаться силанольной группой. Ионизированный силанол заряжен отрицательно, и фосфат отрицательно. Неионизированный силанол не заряжен, тоже фосфат взаимодействовать вроде как не может. Аминогруппа аналита может взаимодействовать с фосфатом, если она будет в форме катиона. Мне тоже неясно, за счет чего амногруппа может ионизироваться. рН пф 5,0. Если это не затруднит, не могли бы Вы детализировать идею?

Avet
Пользователь
Ранг: 1071

12.09.2018 // 9:34:00

SergeyK пишет:
Помимо силанолов, которых там ничтожное в космических масштабах количество, там ещё очешуительно толстая пленка воды на силикагеле, такая, что ваших силанолов не видно ни в микроскоп, ни в телескоп, ни в театральный бинокль.
Вот в этой-то воде часть фосфорной и приютится. Просто статистически она там будет, вам вся фосфорная мира и не нужна.
А смоете вы свой амин, повышая pH, это ведь градиентный метод?

Да в том-то же и еще одна загадка - это изократика.

Avet
Пользователь
Ранг: 1071

12.09.2018 // 12:57:03

Волгин пишет:
Насчет дпнной конкретной методики - не знаю. Но вспоминается, что лет 20 назад приезжал с Запада профессор индийского происхождения ( фамилию забыл - старый я, старый... ) с докладом о "зеленой хроматографии". Так вот, при концентрациях спирта существенно меньше 1% в водно-этонольных смесях силикагель -у него - вел себя как обратная фаза. По вышеупомянутой причине не помню ни конкретных условий ни аналитов...

Уважаемый г-н Волгин, спасибо за информацию, почитаю. Но в данной методике метанол в концентрации 15%

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

12.09.2018 // 22:11:47

Avet пишет:
Признаков HILIC не обнаружил: вещество не суперполярно, хотя растворимость в воде хорошая - water solubility 1000 mg/L (at 20 °C). Но основа HILIC - все-же ацетонитрил, спирты применять не рекомендуется, тем более метанола высокий%.

Какие признаки HILIC вы искали? Полярный сорбент тут имеется. Водно-органическая ПФ имеется. Метанол для HILIC использовать в принципе никто не запрещает. Просто у него гораздо большая элюирующая сила, чем у ацетонитрила + некоторые другие недостатки. Вещество ваше достаточно полярно для HILIC. У фамотидина полярных групп вагон и маленькая тележка. Многоие вещества можно делить и в HILIC, и в ОФ ВЭЖХ. Порядок элюирования только поменяется примерно на противоположный. Далее, для HILIC характерно снижение времен удерживания при росте доли воды в ПФ (потому воды в HILIC-элюентах обычно меньше половины). В PALC зависимость времен удерживания от доли воды в ПФ обратная (как и в ОФ ВЭЖХ). Тут с вашей методикой ясности нет. При желании можете сами поиграть с составом ПФ.

В любом случае, как ни назови, в обсуждаемой методике возможны те же механизмы удерживания, что и в разделениях, именуемых как HILIC. Во-первых, адсорбция за счет взаимодействий (диполь-дипольных, водородных связей и т.п.) вещества непосредственно с поверхностью сорбента. Во-вторых, распределение вещества из основной части ПФ в приповерхностный слой ПФ, существенно обогащенный водой (адсорбированный слой воды). В-третьих, здесь как небольшое дополнение - ионный обмен за счет диссоциированных силанолов.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Эконова, ЗАО Институт хроматографии
Новосибирское ЗАО Институт хроматографии «ЭкоНова» производит микроколоночные жидкостные хроматограф «Милихром® А-02» и «Альфахром»— уникальные приборы экспертного класса для проведения химического анализа.

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

12.09.2018 // 22:30:06

SergeyK пишет:
Помимо силанолов, которых там ничтожное в космических масштабах количество, там ещё очешуительно толстая пленка воды на силикагеле, такая, что ваших силанолов не видно ни в микроскоп, ни в телескоп, ни в театральный бинокль.
Вот в этой-то воде часть фосфорной и приютится. Просто статистически она там будет, вам вся фосфорная мира и не нужна.
А смоете вы свой амин, повышая pH, это ведь градиентный метод?

Силанолов там предостаточно. Уж если на ОДС в ОФ ВЭЖХ диссоциированные остаточные силанолы влияют на удерживание и форму пиков аминов, то тут и подавно. Конечно, ионный обмен на диссоциированных силанолах не являеся основным механизмом удерживания в обсуждаемой методике, но свой вклад он вносит.

Какая связь между распределением в адсорбированный водный слой и ионообменной хроматографией? Где вы увидели ионный обмен? Любой катион, в т.ч. протонированный фамотидин, в ПФ не сам по себе плавает, а с противоионами (с фосфат-анионами). Точно так же он с этими фосфат-анионами в качестве противоионов будет распределяться в приповерхностный водный слой. Никакого ионного обмена в этом нет. С вашей интерпретаций ионообменной хроматографией можно было бы называть любой вариант хроматографии, где есть любой полярный сорбент, раствор любой соли в ПФ и ионогенные аналиты.

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

12.09.2018 // 22:34:07

Avet пишет:
Да в том-то же и еще одна загадка - это изократика.

В чем загадка-то? Изократика как изократика. Как в любом варианте ВЭЖХ. Если удерживается и делится все, что нужно, за приемлемое время, то градиент не нужен.

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

12.09.2018 // 22:37:29

Avet пишет:
Мне тоже неясно, за счет чего амногруппа может ионизироваться. рН пф 5,0.

Амин - основание. Была нейтральная молекула, присоединила ион водорода - стала катионом.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1314

13.09.2018 // 0:30:30

Редактировано 6 раз(а)

Avet пишет:
...Мне тоже неясно, за счет чего амногруппа может ионизироваться. рН пф 5,0. Если это не затруднит, не могли бы Вы детализировать идею?

Не случалось делить амины на ТСХ на силикагеле?
Амины на силикагель, особенно на активированный, садятся намертво. На дезактивированный, - их еще вода может двигать, но о разделении можно забыть. Добавление спирта (метанола, этанола) приводит возникновению больших хвостов.
По этой теме, если не обращать внимания на особенности ТСХ, о механизмах и влиянии рН можно почитать (там-же есть информация и о растворимости силикагеля):
elibrary.sgu.ru/uch_lit/590.pdf
В данном случае реализуется ион-парная хроматография на нормальной фазе. При этом буферный раствор будет составной частью неподвижной фазы, на которой при некотором рН будут делиться амины. При рН 5 ионизацией силанольных групп можно пренебречь.
Фосфаты в Вашем случае являются анионоактивными ПАВ.

Avet
Пользователь
Ранг: 1071

13.09.2018 // 10:50:10

OldBrave пишет:

Avet пишет:
...Мне тоже неясно, за счет чего амногруппа может ионизироваться. рН пф 5,0. Если это не затруднит, не могли бы Вы детализировать идею?
Не случалось делить амины на ТСХ на силикагеле?
Амины на силикагель, особенно на активированный, садятся намертво. На дезактивированный, - их еще вода может двигать, но о разделении можно забыть. Добавление спирта (метанола, этанола) приводит возникновению больших хвостов.
По этой теме, если не обращать внимания на особенности ТСХ, о механизмах и влиянии рН можно почитать (там-же есть информация и о растворимости силикагеля):
elibrary.sgu.ru/uch_lit/590.pdf
В данном случае реализуется ион-парная хроматография на нормальной фазе. При этом буферный раствор будет составной частью неподвижной фазы, на которой при некотором рН будут делиться амины. При рН 5 ионизацией силанольных групп можно пренебречь.
Фосфаты в Вашем случае являются анионоактивными ПАВ.

Спасибо за разъяснение. Это, конечно, очень необычный механизм. Я, например, впервые встречаюсь с подобным механизмом удерживания. НФ - это НФ, ОФ - это ОФ. А тут смешалось все вместе. Причем, что интересно, для данного лек. препарата я не встретил других методик ВЭЖХ анализа.


Ответов в этой теме: 33 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты