Форумы ANCHEM.RU: ВЭЖХ примесей полипептида. На каком приборе?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ примесей полипептида. На каком приборе? >>>

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

ATem
Пользователь
Ранг: 655

30.11.2019 // 10:41:28

Честно говоря - не знаю... Вопрос в том, какой у него рабочий диапазон масс. Не хочу обманывать... Тут лучше спросить Игоря Александровича, все же у него этот прибор в работе

А вопрос о каких концентрациях идет, к слову?) Может и не нужен будет СИМ)

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

02.12.2019 // 8:38:39

Редактировано 1 раз(а)

ATem пишет:

А вопрос о каких концентрациях идет, к слову?) Может и не нужен будет СИМ)

Концентрации основного вещества большие. Растворимо хорошо. Содержание примесей в в нем интересует от 0,2 до нескольких процентов. Самая интересная примесь в разных образцах - 0,2 - 2 %. Больше по молекулярной массе чем основное вещество на 111.
Кстати, в старттопике ошибка. ММ основного вещества не 9500, а 6500 Да. И стоИт задача препаративно выделить из него несколько десятков мг примеси, которая на 111 Да тяжелее, чтобы использовать ее как стандартный образец.
Для начала. естественно требуется отработать разделение в аналитическом масштабе, оглядываясь (на всякий случай) на имеющуюся препаративную колонку с С18. Единственная известная методика определения этой примеси делается на катионообменнике с рассолом (7%) в качестве подвижной фазы. что никак не вяжется с МС и плохо вяжется с будущим препаративным разделением. Причем разрешение с основным пиком всего лишь около 1,5 и методика очень не робастная.

voodensky
Пользователь
Ранг: 526

02.12.2019 // 8:45:06

Редактировано 1 раз(а)

Andrew пишет:
Плохо представляю, как уложиться в 1500. Или даже в 2000. Хотя....

Вот первая статья в поиске
https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/bc990181y
Определяют антитела на электроспрее с квадруполем.
Максимальный пик с зарядом +28 (картинка 4). m/z примерно 1750.
Примесь в одну аминокислоту им поймать вряд ли удастся, но у Вас и масса гораздо меньше.

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

02.12.2019 // 8:53:19

voodensky пишет:

Andrew пишет:
Плохо представляю, как уложиться в 1500. Или даже в 2000. Хотя....
Вот первая статья в поиске
https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/bc990181y
Определяют антитела на электроспрее с квадруполем.
Максимальный пик с зарядом +28 (картинка 4). m/z примерно 1750.
Примесь в одну аминокислоту им поймать вряд ли удастся, но у Вас и масса гораздо меньше.

К сожалению, у меня нет доступа к Full Text, но то что Вы написали обнадеживает. Надо пробовать. Если будут хорошие 4-8 зарядные ионы, то шансы немаленькие. На 800 - 1600 Da поймать разницу в 13 - 28 Da, думаю получится.

virtu
VIP Member
Ранг: 2133

03.12.2019 // 18:20:53

Andrew пишет:
Вопрос: какой MS-детектор нужен, чтобы сделать методику для аналитического, а затем - для препаративного выделения этой примеси?.

Любой масс-анализатор до 1500-2000 m/z, разрешением > 1000 FWHM и ESI (при наличии выбора лучше выбирать импульсное железо - IT, TOF). Тут больше проблем будет с хроматографией.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Верхнеприводная мешалка US-2000A
Предназначены для широкого использования в лабораториях, медицинских учреждениях и на производстве для перемешивания образцов различного объема и вязкости (жидкостей, латексов, жидкого цемента, красок и др.). Скорость вращения от 60 до 2000 об/мин.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

vmu
Пользователь
Ранг: 1234

04.12.2019 // 7:01:27

Редактировано 1 раз(а)

Andrew пишет:
Кстати, в старттопике ошибка. ММ основного вещества не 9500, а 6500 Да. И стоИт задача препаративно выделить из него несколько десятков мг примеси, которая на 111 Да тяжелее, чтобы использовать ее как стандартный образец.
Единственная известная методика определения этой примеси делается на катионообменнике с рассолом (7%) в качестве подвижной фазы.

Сдается мне, что речь идет об апротинине и N-пироглутамилапротинине.

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

04.12.2019 // 7:56:41

Есть опыт работы с ним?

voodensky
Пользователь
Ранг: 526

04.12.2019 // 8:07:57

virtu пишет:

Andrew пишет:
Вопрос: какой MS-детектор нужен, чтобы сделать методику для аналитического, а затем - для препаративного выделения этой примеси?.
Любой масс-анализатор до 1500-2000 m/z, разрешением > 1000 FWHM и ESI (при наличии выбора лучше выбирать импульсное железо - IT, TOF). Тут больше проблем будет с хроматографией.

Andrew пишет:
Есть опыт работы с ним?

Посмотрите
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/pdf/10.1111/j.1467-7652.2008.00321.x
их не напрягает на многозарядных ионах работать

vmu
Пользователь
Ранг: 1234

04.12.2019 // 8:49:52

Редактировано 1 раз(а)

Andrew пишет:
Есть опыт работы с ним?

Было дело. По фармакопейным методикам работал. Методика на пироглутамилапротинин (ПГА) действительно неробастная. Интересно, что в Евр.Ф. и в Амер.Ф. методика одна и та же, но требования к разрешению в одной 1.5, в другой 1.0 (или 1.2, точно не помню). В методике на олигомеры апротинина в Евр.Ф. указана нерабочая колонка с неподходящим диапазоном молекулярных масс.
Не проще ли синтезировать ПГА из апротинина, чем выделять эти доли процента из условно чистого апротинина?

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

04.12.2019 // 10:56:31

Опытный синтетик говорит, что получатся 4 продукта очень близких по свойствам, которые все равно придется разделять, а он это не сможет сделать. Лучше синтезировать "с нуля". Но у нас такой возможности нет. Кто это может сделать в РФ не знаю, а заказывать буржуям - слишком дорого. Вот и ищу возможность выделить из того, что есть.


Ответов в этой теме: 26 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты