Форумы ANCHEM.RU: Начали двоиться пики на аминоксилоты

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Начали двоиться пики на аминоксилоты >>>

  Ответов в этой теме: 30
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Фаина
Пользователь
Ранг: 12

24.07.2020 // 11:24:11

абр пишет:

Фаина пишет:
результат немного улучшился
Т.е. вы дополняли колонку? После использования опять раскручивали и смотрели на сорбент? С первого раза могло и не получиться исправить.

Да именно, после первого внесения и прогона колонки открутили, сорбент немного просел, совсем чуть чуть, выглядела как небольшая трещинка, добавили еще. Попробуем еще посмотреть.
Мне тут подсказали забивать колонку под небольшим вакуумом, не уверена в правильности, но в любом случае создать отрицательное давление сейчас пока нечем. Вот я и подумала, можно ли на УЗ бане подержать колонку, что бы сорбент подсел?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Фаина
Пользователь
Ранг: 12

24.07.2020 // 11:25:40

Шушечка пишет:
А нельзя попробовать другую колонку?

У нас есть парочка обычных С18, но я никогда на них не делала АМК анализ, могу попробовать, но я боюсь что могу испортить их фосфатным буфером.

Фаина
Пользователь
Ранг: 12

24.07.2020 // 11:28:53

ArtPharm пишет:
исследовательская лаба...да
ну что, здорово. рисуйте дальше ваши протоколы, спасибо путя

Что значит рисуйте дальше? Я где то говорила, что мы рисуем протоколы?

абр
Пользователь
Ранг: 913

24.07.2020 // 15:32:29

Фаина пишет:
подсказали забивать колонку под небольшим вакуумом

Небольшой вакуум вам ничего не даст. В УЗ баню лично я бы сунул колонку только перед выбрасыванием, как последний шанс. Попробуйте долго на маленькой скорости помыть колонку чистым обезгаженным ацетонитрилом (после отмывки от солей, естественно)

Волгин
VIP Member
Ранг: 1328

26.07.2020 // 15:18:58

Фаина пишет:
Вот я и подумала, можно ли на УЗ бане подержать колонку, что бы сорбент подсел?

Ни в коем случае! Убъете сорбент необратимо.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Лаборатория стереохимии сорбционных процессов (ЛССП) ИНЭОС РАН
Анализы различных классов соединений (органический синтез, биотехнология, загрязнения почвы, воды, анализ энантиомерного состава) методами ВЭЖХ и ГХ.

AA_Alex
Пользователь
Ранг: 375

26.07.2020 // 18:07:15

Фаина пишет:

Шушечка пишет:
А нельзя попробовать другую колонку?
У нас есть парочка обычных С18, но я никогда на них не делала АМК анализ, могу попробовать, но я боюсь что могу испортить их фосфатным буфером.

Здесь методика на Zorbax Eclips C18
https://www.agilent.com/cs/library/applications/5990-4547EN.pdf
Собственно, ваша Eclips AAA колонка тоже, если не ошибаюсь, С18. На С18 вполне можно работать с фосфатным буфером, тем более он у вас всего 10 мМ. Так что попробуйте. Какие у вас есть С18 колонки? Если я правильно понял у вас OPA дериватизированные АК? Если беспокоитесь по поводу буфера, сделайте после градиента (он у вас до 60% орг фазы?) промывку 50:50 водой/орг фазой из 3-го канала, чтобы вымыть буфер, а потом промывку колонки до 100% орг фазой. Хотя для 10 мМ буфера это, скорее всего, излишняя предосторожность. У вас орг фаза 45/45/10 ACN/MeOH/H2O? Возьмите для проверки ваш буфер и смешай те в пробирке 10 к 90 с орг фазой. Скорее всего ничего никуда не выпадет. У вас же есть в вашей методике в программе градиента отмывка 100% орг фазой?

Фаина
Пользователь
Ранг: 12

27.07.2020 // 12:24:04

AA_Alex пишет:

Здесь методика на Zorbax Eclips C18
https://www.agilent.com/cs/library/applications/5990-4547EN.pdf
Собственно, ваша Eclips AAA колонка тоже, если не ошибаюсь, С18. На С18 вполне можно работать с фосфатным буфером, тем более он у вас всего 10 мМ. Так что попробуйте. Какие у вас есть С18 колонки? Если я правильно понял у вас OPA дериватизированные АК? Если беспокоитесь по поводу буфера, сделайте после градиента (он у вас до 60% орг фазы?) промывку 50:50 водой/орг фазой из 3-го канала, чтобы вымыть буфер, а потом промывку колонки до 100% орг фазой. Хотя для 10 мМ буфера это, скорее всего, излишняя предосторожность. У вас орг фаза 45/45/10 ACN/MeOH/H2O? Возьмите для проверки ваш буфер и смешай те в пробирке 10 к 90 с орг фазой. Скорее всего ничего никуда не выпадет. У вас же есть в вашей методике в программе градиента отмывка 100% орг фазой?

Добрый день. Во первых хочу поблагодарить за помощь и советы. Новую колонку заказали, должны в среду доставить. Поэтому думаю наверное уже не актуально.
Хотя лично для себя хочу все таки попробовать в свободное время реанимировать колонку. Если есть еще идеи, что я могу попробовать с ней сделать, может промыть еще чем нибудь или что нибудь другое, я с благодарностью приму ваши советы.

Отвечая на вопросы, С18 колонки именно Zorbax Eclips C18, 1 рабочая две прозапас. Фосфатный буфер мы используем 40 мМ. Анализ проводим согласно инструкции вот этой https://www.labicom.cz/cogwpspogd/uploads/2016/07/5980-3088_AAA_Datasheet.pdf
Да, промывка в методике предусмотрена. Плюс после анализов дополнительно колонка ставиться на промывку.
Ещё один вопрос, так как мы очень ограничены в метаноле, можно ли для органической фазы заменить его этанолом в том же количестве?

Ещё раз большое спасибо всем, кто откликнулся.

vmu
Пользователь
Ранг: 1382

27.07.2020 // 13:40:58

Фаина пишет:
а вот так было до двоения
https://ibb.co/CHRzd5C

А где гистидин? Сдается мне, что там что-то напутано с идентификацией пиков.
То, что на хроматограмме обозначено как Gly - Thr - Arg - Ala - Tyr - Cys, больше похоже на His - Gly - Thr - Arg - Ala - Tyr соответственно, а Met - на Val+Met.

Фаина пишет:
ограничены в метаноле, можно ли для органической фазы заменить его этанолом в том же количестве?

Нет, нельзя. Вам бы почитать книжек по основам ВЭЖХ.

Волгин
VIP Member
Ранг: 1328

27.07.2020 // 13:47:19

Редактировано 1 раз(а)

Фаина пишет:
Ещё один вопрос, так как мы очень ограничены в метаноле, можно ли для органической фазы заменить его этанолом в том же количестве?

Ответ на этот вопрос примерно такой: "Туалетной бумаги нет, могу предложить наждачную."

Если серьезно, может быть и можно, но нужно подбирать условия, варьируя концентрацию этанола, солей, рН и, возможно, меняя сами соли. При этом - без гарантии.

Шушечка
Пользователь
Ранг: 518

29.07.2020 // 9:58:29

Фаина пишет:

AA_Alex пишет:

Здесь методика на Zorbax Eclips C18
https://www.agilent.com/cs/library/applications/5990-4547EN.pdf
Собственно, ваша Eclips AAA колонка тоже, если не ошибаюсь, С18. На С18 вполне можно работать с фосфатным буфером, тем более он у вас всего 10 мМ. Так что попробуйте. Какие у вас есть С18 колонки? Если я правильно понял у вас OPA дериватизированные АК? Если беспокоитесь по поводу буфера, сделайте после градиента (он у вас до 60% орг фазы?) промывку 50:50 водой/орг фазой из 3-го канала, чтобы вымыть буфер, а потом промывку колонки до 100% орг фазой. Хотя для 10 мМ буфера это, скорее всего, излишняя предосторожность. У вас орг фаза 45/45/10 ACN/MeOH/H2O? Возьмите для проверки ваш буфер и смешай те в пробирке 10 к 90 с орг фазой. Скорее всего ничего никуда не выпадет. У вас же есть в вашей методике в программе градиента отмывка 100% орг фазой?
Добрый день. Во первых хочу поблагодарить за помощь и советы. Новую колонку заказали, должны в среду доставить. Поэтому думаю наверное уже не актуально.
Хотя лично для себя хочу все таки попробовать в свободное время реанимировать колонку. Если есть еще идеи, что я могу попробовать с ней сделать, может промыть еще чем нибудь или что нибудь другое, я с благодарностью приму ваши советы.

Отвечая на вопросы, С18 колонки именно Zorbax Eclips C18, 1 рабочая две прозапас. Фосфатный буфер мы используем 40 мМ. Анализ проводим согласно инструкции вот этой https://www.labicom.cz/cogwpspogd/uploads/2016/07/5980-3088_AAA_Datasheet.pdf
Да, промывка в методике предусмотрена. Плюс после анализов дополнительно колонка ставиться на промывку.
Ещё один вопрос, так как мы очень ограничены в метаноле, можно ли для органической фазы заменить его этанолом в том же количестве?

Ещё раз большое спасибо всем, кто откликнулся.

Вы поймите одно, что реанимация колонки это просто танцы с бубнами... Вам коллеги на форуме уже подсказали что можно использовать другую колонку и даже фазы указали. Если есть свободное время, то лучше не реанимируйте колонку, а попробуйте на другой колонке разогнать аминокислоты. Пусть будут две методы, на всякий случай.. отвалидируйте и все... а убить С18 фосфатным буфером это конечно надо постараться))) Правильное использование колонки, а главное промывка и консервация- залог долгой службы колонки.
Почему мог просесть сорбент в колонке? проанализируйте ситуацию... может неправильная эксплуатация? Я понимаю не отмытая колонка, не консервированная, но сорбент когда проседает- над этим стоит задуматься.


Ответов в этой теме: 30 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты