Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

SEC: какими способами избавляются от ассоциатов? >>>

  Ответов в этой теме: 31
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: SEC: какими способами избавляются от ассоциатов?
Avet
Пользователь
Ранг: 880

23.07.2020 // 11:53:43     
Коллеги, в той же теме SEC возник вопрос: если целевое вещество способно к образованию ассоциатов, то полученное значение молекулярной массы будет, конечно, завышено. Как избавиться от ассоциатов?
Заранее благодарю откликнувшихся.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
vmu
Пользователь
Ранг: 526


23.07.2020 // 23:13:53     
Редактировано 1 раз(а)

Например, используя растворитель, предотвращающий образование ассоциатов или разрушающий их, если их образование обратимо.
Если уточните вопрос, то, возможно, получите более подробный ответ.
Если говорить о белках, то, например, в лек. средствах белковой природы ассоциаты (белковые агрегаты, димеры, олигомеры) являются нежелательными примесями, содержание которых нормируется и контролируется. Тут, естественно, речь не об определении мол. массы, а просто об определении примесей методом эксклюзионной хроматографии.
Avet
Пользователь
Ранг: 880


24.07.2020 // 8:08:04     
Редактировано 2 раз(а)


vmu пишет:
Например, используя растворитель, предотвращающий образование ассоциатов или разрушающий их, если их образование обратимо.
Если уточните вопрос, то, возможно, получите более подробный ответ.
Если говорить о белках, то, например, в лек. средствах белковой природы ассоциаты (белковые агрегаты, димеры, олигомеры) являются нежелательными примесями, содержание которых нормируется и контролируется. Тут, естественно, речь не об определении мол. массы, а просто об определении примесей методом эксклюзионной хроматографии.

Большое спасибо! Ассоциат четко прослеживается, так как м.масса вдвое выше ожидаемой.
И еще: в одинаковых условиях анализа наблюдается существенное различие (примерно в 2 раза) в значениях получаемых ММ в зависимости от того, каким стандартом проводили калибровку (узким или широким). Причем получаемая ММ ближе к значению ММ из сертификата в том случае, если калибровку проводили по узкому стандарту.С чем может быть связано такое существенное различие по получаемым ММ в зависимости от стандартов?
И еще вопрос: появляется большой отрицательный пик при инжекции подвижной фазы. с чем это может быть связано?
Благодарю заранее
Valerа1234
Пользователь
Ранг: 2404


24.07.2020 // 10:20:13     
есть возможность снять зависимость ММ от концентрации мономера?

измерить другим методом?

пока только вискозиметрия или ещё какие?
Avet
Пользователь
Ранг: 880


24.07.2020 // 11:22:38     

Valerа1234 пишет:
есть возможность снять зависимость ММ от концентрации мономера?

измерить другим методом?

пока только вискозиметрия или ещё какие?

Это метод ВЭЖХ, методика утверждена
Valerа1234
Пользователь
Ранг: 2404


24.07.2020 // 12:44:56     
укажите, пожалуйста, АСТМ
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Испытательный центр ВНИИИ мясной промышленности Испытательный центр ВНИИИ мясной промышленности
Основное направление работы - контроль качества и безопасности пищевой продукции, продовольственного сырья, кормов для животных и питьевой воды. Организация и управление работами по испытаниям осуществляются в соответствии с ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006 "Общие требования к компетентности испытательных и калибровочных лабораторий".
Avet
Пользователь
Ранг: 880


24.07.2020 // 14:08:41     

Valerа1234 пишет:
укажите, пожалуйста, АСТМ
Знаю, что будете возмущаться, но укажите, что Вы имеете ввиду
Valerа1234
Пользователь
Ранг: 2404


25.07.2020 // 1:19:12     
я сразу понял, что в работе ЖХ, но хотелось бы уточнить, по какому нормативному документу работаете - лень даже искать - какие применяются

укажИте - скачаю, надеюсь
Avet
Пользователь
Ранг: 880


25.07.2020 // 18:53:27     

Valerа1234 пишет:
я сразу понял, что в работе ЖХ, но хотелось бы уточнить, по какому нормативному документу работаете - лень даже искать - какие применяются

укажИте - скачаю, надеюсь

К сожалению, не могу, это внутренний нормативный документ предприятия. Конфиденциальность, сами понимаете.
Valerа1234
Пользователь
Ранг: 2404


26.07.2020 // 1:33:25     
тогда вопросы не на форум, а к разработчикам секретной методики, сами понимаете
AA_Alex
Пользователь
Ранг: 320


26.07.2020 // 18:42:48     

Avet пишет:

vmu пишет:
Например, используя растворитель, предотвращающий образование ассоциатов или разрушающий их, если их образование обратимо.
Если уточните вопрос, то, возможно, получите более подробный ответ.
Если говорить о белках, то, например, в лек. средствах белковой природы ассоциаты (белковые агрегаты, димеры, олигомеры) являются нежелательными примесями, содержание которых нормируется и контролируется. Тут, естественно, речь не об определении мол. массы, а просто об определении примесей методом эксклюзионной хроматографии.

Большое спасибо! Ассоциат четко прослеживается, так как м.масса вдвое выше ожидаемой.
И еще: в одинаковых условиях анализа наблюдается существенное различие (примерно в 2 раза) в значениях получаемых ММ в зависимости от того, каким стандартом проводили калибровку (узким или широким). Причем получаемая ММ ближе к значению ММ из сертификата в том случае, если калибровку проводили по узкому стандарту.С чем может быть связано такое существенное различие по получаемым ММ в зависимости от стандартов?
И еще вопрос: появляется большой отрицательный пик при инжекции подвижной фазы. с чем это может быть связано?
Благодарю заранее


Мол массу белков не определяют из калибровочной кривой, прописанной в мануале к колонке. То есть это конечно можно сделать, но при этом можно очень сильно ошибиться. У вас ведь белок не денатурированный, а нативный. И времена удерживания у двух разных белков с одинаковой мол массой, но разными динамическими радиусами (которые определяются третичной-четвертичной структурой белка) могут сильно отличаться. В качестве примера из практики. Два разных МкАТ (мол масса практически одинаковая 150 кДа) - у одного белка время удерживания димера практически совпадает с таковым мономера другого.
Если у вас контроль содержания примеси агрегатов чистого (фармацевтического?) конкретного белка (значит он охарактеризован и известна его точная мол масса), то зачем вам калибровка колонки по мол массам? Насколько я помню из ГФ, просто по относительным площадям пиков мономера и агрегатов делается расчет и смотрят, не превышено ли то, что прописано в НД.
И проверьте систему, при вколе ПФ не должно быть никаких значительных пиков на вкол. У вас инжектор или автосамплер? Если инжектор, может где-то воздух попадает?

  Ответов в этой теме: 31
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты