Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017 >>>

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

28.07.2020 // 11:48:37     
Здравствуйте. Прошу помощи.
Стоит задача внедрения методики определения лизина вэжх.
За основу взяла ГОСТ 34230-2017
Хроматограф Agilent, колонка zorbax sb c18.
Градиентного элюирования нет. Приготовила две фазы: фаза А ацетатный буфер ph7,2, фаза Б буфер-ацетонитрил-метанол. Для элюирования смешала фазы А/Б (30/70).
Дериватизация ОРА как в ГОСТе
Детектирование 266/305нм.
Я не вижу пиков лизина.
Подскажите, в чем может быть ошибка, пожалуйста.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
vmu
Пользователь
Ранг: 526


28.07.2020 // 13:07:55     
Определения лизина в чем?
Внедрения методики или разработки методики? Если "за основу взяла", то, видимо, разработки.
Дериватизация ОФА вручную, как в ГОСТ, а не в автосамплере хроматографа, воспроизводится очень плохо. ОФА-производные нестабильны, площади пиков будут плавать плюс-минус километр. Нужен точный контроль всех стадий дериватизации, что вручную сделать нереально. При плохом раскладе лизин может давать порядка пяти пиков ОФА-производных.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12


28.07.2020 // 13:39:58     
К сожалению, у меня нет автосемплера.
Воспроизвести не получается даже на чистом стандарте лизина.
Подскажите, пожалуйста, как при ручном проведении дериватизации, получить стабильную производную. И увидеть пик.???
vmu
Пользователь
Ранг: 526


28.07.2020 // 14:10:04     
Редактировано 1 раз(а)

Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов. Но по своему опыту скажу, что ручная дериватизация с ОФА - это не самая удачная затея.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12


28.07.2020 // 14:19:12     

vmu пишет:
Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. То, что вы не видите пиков производных лизина, может быть элементарно связано, например, с тем, что элюирующей силы ПФ недостаточно. Попробуйте 100 % ПФ Б. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов.
Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно?
vmu
Пользователь
Ранг: 526


28.07.2020 // 14:22:16     
Редактировано 1 раз(а)


Ссссвта пишет:
Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно?
Нет, чем больше органики (т.е. Б), тем больше элюирующая сила. Но со 100 % Б я перестарался. 70 % Б должно хватать. Вопрос только во времени удерживания: 5 мин? 10 мин? 15 мин?
А может, на 70 % Б он выходит в мертвом времени, и надо наоборот снизить элюирующую силу.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Микроскоп бинокулярный UV-1390В Микроскоп бинокулярный UV-1390В
Высококлассный микроскоп, предназначенный для исследований в проходящем свете и светлом поле. Служит для биохимических, патологоанатомических, цитологических, гематологических, урологических, дерматологических, биологических и общеклинических исследований в лабораториях любого типа медицинских учреждений. Увеличение: 40х-1500х. Объективы: IOS планахроматические, 4х, 10х, 20х, 40х и 100х МИ
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
vmu
Пользователь
Ранг: 526


28.07.2020 // 14:30:36     
В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12


28.07.2020 // 14:40:48     

vmu пишет:
В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами.
Ничего себе!
Спасибо огромное!
Я ещё раз попробую и если не получиться, можно вам написать?
AlteredCarbon
Пользователь
Ранг: 14


28.07.2020 // 20:48:38     
по длинам волн странный выбор, вот например материал по производным:
https://www.glsciences.com/technique/app/detail.php?data_number=LB088

vmu
Пользователь
Ранг: 526


28.07.2020 // 21:19:15     
Редактировано 2 раз(а)

Да, длины волн из первого сообщения не под ОФА-производные, а под FMOC-производные (для пролина). В ГОСТ 34230-2017 и это перепутали.
Вообще нужен ли топикстартеру флуориметрический детектор, неясно. Про объект анализа и определяемые концентрации лизина ТС ничего не сказала. Может ей и УФ-детектора на 338 нм хватит.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12


29.07.2020 // 8:32:56     
По поводу объекта, у меня будет культуральная жидкость синтеза лизина. Ожидаемые концентрации 10г/л. Необходимо определять количественно.
Пока у меня не получается со стандартом.
Сегодня попробую на 338нм.
И заменю длины волн на ФМД.
Спасибо огромное, что откликнулись, впервые ставлю метод на ВЭЖХ, прибор новый. До этого только ГЖХ. Туплю...

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты