Форумы ANCHEM.RU: Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017 >>>

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017

Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

28.07.2020 // 11:48:37

Здравствуйте. Прошу помощи.
Стоит задача внедрения методики определения лизина вэжх.
За основу взяла ГОСТ 34230-2017
Хроматограф Agilent, колонка zorbax sb c18.
Градиентного элюирования нет. Приготовила две фазы: фаза А ацетатный буфер ph7,2, фаза Б буфер-ацетонитрил-метанол. Для элюирования смешала фазы А/Б (30/70).
Дериватизация ОРА как в ГОСТе
Детектирование 266/305нм.
Я не вижу пиков лизина.
Подскажите, в чем может быть ошибка, пожалуйста.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

28.07.2020 // 13:07:55

Определения лизина в чем?
Внедрения методики или разработки методики? Если "за основу взяла", то, видимо, разработки.
Дериватизация ОФА вручную, как в ГОСТ, а не в автосамплере хроматографа, воспроизводится очень плохо. ОФА-производные нестабильны, площади пиков будут плавать плюс-минус километр. Нужен точный контроль всех стадий дериватизации, что вручную сделать нереально. При плохом раскладе лизин может давать порядка пяти пиков ОФА-производных.

Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

28.07.2020 // 13:39:58

К сожалению, у меня нет автосемплера.
Воспроизвести не получается даже на чистом стандарте лизина.
Подскажите, пожалуйста, как при ручном проведении дериватизации, получить стабильную производную. И увидеть пик.???

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

28.07.2020 // 14:10:04

Редактировано 1 раз(а)

Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов. Но по своему опыту скажу, что ручная дериватизация с ОФА - это не самая удачная затея.

Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

28.07.2020 // 14:19:12

vmu пишет:
Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. То, что вы не видите пиков производных лизина, может быть элементарно связано, например, с тем, что элюирующей силы ПФ недостаточно. Попробуйте 100 % ПФ Б. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов.

Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно?

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

28.07.2020 // 14:22:16

Редактировано 1 раз(а)

Ссссвта пишет:
Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно?

Нет, чем больше органики (т.е. Б), тем больше элюирующая сила. Но со 100 % Б я перестарался. 70 % Б должно хватать. Вопрос только во времени удерживания: 5 мин? 10 мин? 15 мин?
А может, на 70 % Б он выходит в мертвом времени, и надо наоборот снизить элюирующую силу.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Ротационый испаритель UL-2000
Предназначены для проведения процессов, сопряженных с быстрым удалением растворителей из растворов или суспензий органических и неорганических соединений путем испарения при нормальном и пониженном давлении и контролируемой температуре. Объем испарительных колб от 25 мл до 2 л. Скорость вращения: 20-200 об/мин. Высота подъемника: 0-150 мм.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

28.07.2020 // 14:30:36

В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами.

Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

28.07.2020 // 14:40:48

vmu пишет:
В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами.

Ничего себе!
Спасибо огромное!
Я ещё раз попробую и если не получиться, можно вам написать?

AlteredCarbon
Пользователь
Ранг: 54

28.07.2020 // 20:48:38

по длинам волн странный выбор, вот например материал по производным:
https://www.glsciences.com/technique/app/detail.php?data_number=LB088

vmu
Пользователь
Ранг: 1237

28.07.2020 // 21:19:15

Редактировано 2 раз(а)

Да, длины волн из первого сообщения не под ОФА-производные, а под FMOC-производные (для пролина). В ГОСТ 34230-2017 и это перепутали.
Вообще нужен ли топикстартеру флуориметрический детектор, неясно. Про объект анализа и определяемые концентрации лизина ТС ничего не сказала. Может ей и УФ-детектора на 338 нм хватит.

Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

29.07.2020 // 8:32:56

По поводу объекта, у меня будет культуральная жидкость синтеза лизина. Ожидаемые концентрации 10г/л. Необходимо определять количественно.
Пока у меня не получается со стандартом.
Сегодня попробую на 338нм.
И заменю длины волн на ФМД.
Спасибо огромное, что откликнулись, впервые ставлю метод на ВЭЖХ, прибор новый. До этого только ГЖХ. Туплю...


Ответов в этой теме: 25 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты