| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017 >>>
|
 |
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
 29.07.2020 // 8:39:21
В этом материале тоже лизин определяется 266/305. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Шушечка Пользователь Ранг: 518 |
29.07.2020 // 10:02:46
Снимите спектр на ВЭЖХ, где максимум... заколите стандарт и увидите, тот и выставите на программе потом. |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1337 |
29.07.2020 // 10:55:11
Редактировано 2 раз(а) Нет, там с 0 по 29 мин для ОФА-производных первичных аминокислот, включая лизин, используют 350/450 нм, а после 29 мин переключают на 266/305 нм для детектирования FMOC-производного пролина. Спектры снять можно, если прибор позволяет (какой прибор-то? Agilent увидел, FLD свои спектры возбуждения/испускания снимет; а УФ-детектор какой: DAD, VWD, MWD? Спектры поглощения пишет только DAD. Agilent 1100, 1200, 1260, 1290? И что, Agilent без автосамлера? и без градиентного насоса???), но вещества изъезженные вдоль и поперек, так что получите вы то же, что в литературе: тот же максимум поглощения (и возбуждения флуоресценции) в районе 338 нм (350 нм) и тот же максимум испускания флуоресценции в районе 450 нм. |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1337 |
29.07.2020 // 11:08:46
Вообще, если есть только возможность делать дериватизацию только вручную, то я вместо ОФА смотрел бы в сторону набора Waters AccQ-Tag (или AccQ-Tag Ultra, если у вас УВЭЖХ система): https:// Концентрации лизина у вас высокие, поэтому высокой чувствительности флуоресцентника вам не надо. С другой стороны, объект анализа не самый простой, и флуоресцентник может дать дополнительную селективность. |
|||||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
29.07.2020 // 12:14:50
Спасибо. Обязательно попробую)) |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
29.07.2020 // 14:19:02
Поменяла длины волн, и о чудо!!!! мой лизин нашёлся. Спасибо Вам огромное, столько возились со мной. Теперь буду двигаться дальше потихоньку. Воспроизводимость, график, пробы... |
|||||
|
Шушечка Пользователь Ранг: 518 |
30.07.2020 // 6:25:07
ГОСТ написан на смесь кислот и максимум там взят был не на лизин. Советую в будущем всегда снимать спектр исследуемого вещества и только затем дальше плясать. Селективность не забудьте посмотреть помимо воспроизводимости. |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1337 |
30.07.2020 // 10:11:46
Редактировано 1 раз(а) Снимать спектры это хорошо (способен ли на это прибор ТС, если там нет даже градиентного насоса, не говоря уж про автосамплер?), но хромофорная/флуоресцирующая группа там одна на все аминокислоты, получающаяся от дериватизирующего реагента, поэтому спектры там особо не отличаются (в области длин волн примерно от 230 нм для АК без своих длинноволновых хромофорных групп и от 300 нм для всяких тирозинов, фенилаланинов, триптофанов). Проблема этого ГОСТ не в том, что "максимум взят не на лизин", а в том, что они вообще перепутали длины волн для ОФА- и FMOC-производных. Про перепутанные ПФ А и Б в программе элюирования я тоже писал. Если внимательно почитать, то, полагаю, в этом ГОСТ можно еще много чего найти, написанного через одно место. Можно только посочувствовать тому, кто попытаетя работать по этому ГОСТ. |
|||||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
30.07.2020 // 14:00:25
Добрый день. Ещё раз спасибо за Советы и помощь. Сигнал детектора поставила 340/450. Элюент буфер-ацетонитрил-метанол 30-30-40. Пик выходит тройным. Если элюент взять чистый ацетонитрил-вода 80-20 Пик выходит двойным. Почему так может быть. У лизина две аминогруппы, может реакция идёт по каждой? И возможно ли условиями хроматографирования их объединить? |
|||||
|
vmu Пользователь Ранг: 1337 |
30.07.2020 // 14:24:36
Редактировано 1 раз(а) Несомненно, реакция идет по обеим аминогруппам. Итого, как минимум 3 производных (по первой, по второй или по обеим группам). За счет еще каких-то реакций на хроматограмме от лизина могут быть и еще пики (поменьше). Сам лично видел 5 пиков. Писал об этом в первом ответе. Причем в плохо контролируемой ручной дериватизации получить несколько пиков шансы возрастают. Хроматографически объединить эти пики можно только таким образом, что у вас лизин не будет делиться и с другими компонентами, или вообще путем отправки их в мертвое время. В принципе можно просто для анализа использовать один (наибольший) пик, вопрос только в повторяемости и линейности. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 25
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
