08.11.2021 // 15:50:35

---

Avet пишет:

---

Волгин пишет:
С моей, как упаковщика колонок, точки зрения, могут не соблюдаться идентичные - именно идентичные - условия упаковки колонок. Скажем, если упаковка должна проводиться при 300 атм, то отступление на 10 атм в ту или иную сторону грехом зачастую не считается. А это уже может сказаться на плотности упаковки и, следовательно, ином поведении колонок при проведении анализа. То же может происходить при различной прибавке давления упаковки, если такое предусмотрено методикой. К тому же результату могут привести банально неповеренные манометры на установках для упаковки колонок, если упаковка одного и того же сорбента проводится на нескольких пакерах. И, конечно, это может произойти, если суспензия для упаковки случайно готовится в слегка отличающихся по составу раствороителях. Из собственного опыта: недавно мне привезли канистру хч ацетона с наклейкой и паспортом. Но в ней ацетона было меньше 1%, а остальное - изопропанол . На базе перепутали бочки. Это конечно крайний случай, но случаи с разной влажностью тех же ацетона или спиртов, используемых для упаковки встречаются и наверное не только у нас. Не думаю, что буржуи для упаковки используют HPLC grade растворители.

---

Уважаемый г-н Волгин, благодарю Вас за то, что отозвались. Вопрос в том, что речь идет только о колонках для эксклюзионной ВЭЖХ, причем известных производителей. В ОФ ВЭЖХ для колонок одного батча такая проблема встречается весьма редко, а проблема "выплыла" в эксклюзионной ВЭЖХ. Может быть. у Вас есть информация именно по такому направлению?

---

08.11.2021 // 17:08:20

---

Волгин пишет:

---

Avet пишет:

---

Волгин пишет:
С моей, как упаковщика колонок, точки зрения, могут не соблюдаться идентичные - именно идентичные - условия упаковки колонок. Скажем, если упаковка должна проводиться при 300 атм, то отступление на 10 атм в ту или иную сторону грехом зачастую не считается. А это уже может сказаться на плотности упаковки и, следовательно, ином поведении колонок при проведении анализа. То же может происходить при различной прибавке давления упаковки, если такое предусмотрено методикой. К тому же результату могут привести банально неповеренные манометры на установках для упаковки колонок, если упаковка одного и того же сорбента проводится на нескольких пакерах. И, конечно, это может произойти, если суспензия для упаковки случайно готовится в слегка отличающихся по составу раствороителях. Из собственного опыта: недавно мне привезли канистру хч ацетона с наклейкой и паспортом. Но в ней ацетона было меньше 1%, а остальное - изопропанол . На базе перепутали бочки. Это конечно крайний случай, но случаи с разной влажностью тех же ацетона или спиртов, используемых для упаковки встречаются и наверное не только у нас. Не думаю, что буржуи для упаковки используют HPLC grade растворители.

---

Уважаемый г-н Волгин, благодарю Вас за то, что отозвались. Вопрос в том, что речь идет только о колонках для эксклюзионной ВЭЖХ, причем известных производителей. В ОФ ВЭЖХ для колонок одного батча такая проблема встречается весьма редко, а проблема "выплыла" в эксклюзионной ВЭЖХ. Может быть. у Вас есть информация именно по такому направлению?

---

Разве я хоть полслова написал, что имею в виду ОФ?
А вот Вы в первом посте писали: " Если это колонки на основе силикагеля, то обьяснение понятно, а если основа фазы другая?" И именно на этот вопрос я пытался дать Вам ответ.
В отличие от силикагеля полимерные сорбенты относятся в большинстве своем к классу полужестких сорбентов. Их сжимаемость существенно выше, частицы способны изменять форму и прижиматься друг к другу сильнее, чем частицы силикагеля, образуя застойные зоны. И именно для этого случая будет существенным различие в те 20 бар, о которых я писал. А поскольку производители колонок работают на границе прочности частиц (это мое "оценочное суждение", т.к. работа на меньших давлениях упаковки приведет к большей склонности сорбента к просаживанию), то 20 бар или разная скорость наращивания давления при упаковке могут явится причиной описанного Вами явления. Это не говоря о том, что и плотность упакованного слоя, а следовательно суммарная площадь поверхности и даже распределение пор по размерам могут измениться за счет деформации частиц.

---

12.11.2021 // 10:57:13

---

Avet пишет:
На эту тему получил более конкретную инфомацию. Неэквивалентность наблюдалась для колонок Superdex 200 Increase 300/10GL, элюент 20мМ Na2HPO4, 100мМ Na2SO4, pH 7.0, 2% EtOH. Это "чисто" эксклюзионные колонки.

---

---

Avet пишет:
Также неэквивалентность зафиксирована для Колонки Phenomenex Jupiter C18, 4.6*250mm, 300Å, 5 мкм + предколонка С18.
Элюент А: 0,2% ТФУ в 30% ацетонитриле
Элюент В: 0,2% ТФУ в 80% ацетонитриле
Буду благодарен за отзывы, мнения и т.д.

---

12.11.2021 // 16:22:34

---

voodensky пишет:

---

Avet пишет:
На эту тему получил более конкретную инфомацию. Неэквивалентность наблюдалась для колонок Superdex 200 Increase 300/10GL, элюент 20мМ Na2HPO4, 100мМ Na2SO4, pH 7.0, 2% EtOH. Это "чисто" эксклюзионные колонки.

---

Опять же, сложно сказать о чем говорится.
Что считать неэквивалентностью? Пусть пики не делятся. Они не делятся из-за чего? из-за того что стали широки, стали хвостить или наехали друг на друга?
Что за образец? На чем-то простом, типа БСА или тестового раствора из паспорта эквивалентность есть?
Буферная емкость не очень большая, pH образца может измениться, да и само значение может быть не оптимальным. Что за образец.

---

Avet пишет:
Также неэквивалентность зафиксирована для Колонки Phenomenex Jupiter C18, 4.6*250mm, 300Å, 5 мкм + предколонка С18.
Элюент А: 0,2% ТФУ в 30% ацетонитриле
Элюент В: 0,2% ТФУ в 80% ацетонитриле
Буду благодарен за отзывы, мнения и т.д.

---

Колонки старые, производятся давно. Системы с ТФУ могут долго уравновешиваться. Концентрация ТФУ большая, колонка может быстро умирать. Лучше брать 0,05%.
И опять же вопросы в том, какие параметры изменяются при неэквивалентности? Что за образец и что дает анализ какой-нибудь стандартной смеси?

---

16.11.2021 // 10:04:40

---

OldBrave пишет:
Причина, на мой взгляд, заключается в самих объектах. т.е. в крупных белках. Думается состав элюента сильно влияет на размер и геометрию образующейся глобулы. Отсюда и не предсказуемый выход и форма пика. В принципе различное содержание органики в элюенте может изменять геометрию пор в насадке.

---

16.11.2021 // 10:18:27

---

SergeyK пишет:
А ваш анализ как-то у кого-то идет вообще? Велика вероятность, что ваш аналит плохо помещается в поры и выходит почти в мертвом объеме или около того, но поскольку канализация каждой колонки индивидуальна, то вы хроматогрфируете именно эту канализацию своими аналитами, как тестовой смесью. Попробуйте оценить размер аналитов или найти колонку с порами покрупнее, посмотрите, как другие работают с этими аналитами или аналогичными

---

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему