| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Опасность использования тетрабутиаммония гидросульфата на колонке С18 >>>
|
 |
| Автор | Тема: Опасность использования тетрабутиаммония гидросульфата на колонке С18 | |||||
|
Jora Пользователь Ранг: 23 |
 19.11.2010 // 11:33:41
Редактировано 2 раз(а) Добрый день! Мы занимаемся ВЭЖХ, но имеем пока достаточно небольшой опыт. Возникла необходимость использования ион-парной хроматографии, а колонка такой длины одна (вообще их две пока). Как нам поступить, чтобы не испортить колонку и имеем ли мы шанс ее испортить? Исходные данные: Колонка - Agilent Eclipse XDB-C18 4,6 мм х 250 мм, 5 мкм. Согласно описанию, колонка имеет двойное эндкеппирование. Система - фосфатный буфер рН 6 (15мМоль) + 10 мМоль тетрабутиламмония гидросульфата. Вещества - производные цитидина, уридина. Вопросы: 1. Сможем ли мы получать на колонке воспроизводимые результаты после применения ион-парного реагента? 2. Чем лучше отмывать колонку после применения ион-парного реагента и как понять, что колонка отмыта? 3. Можем ли мы попробовать заменить тетрабутиламмония гидросульфат на тетрабутиламмония бромид (более нам доступный) без вреда для колонки? 4. Может ли сильно повлиять такая замена на эффективность разделения? Заранее спасибо! PS Если можно, дайте какие-нибудь ссылочки на особенности и безопасность применения ион-парных реагентов на колонках С18, надо определиться, просить ли запасную колонку для подстраховки или нет и мотивировать чем-то. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Алексей (СамГУ) Пользователь Ранг: 367 |
19.11.2010 // 12:00:14
Редактировано 2 раз(а) Добрый день! Последние три года занимаюсь анализом различных сульфированных производных полиароматических углеводородов методом ион-парной хроматографии. В качестве одного из компонентов подвижной фазы использую 0.01 M раствор тетрабутиламмония бромида, колонка Reprosil-Pur Basic C18, также в качестве компонента ПФ используется фосфатный буфер pH=6.9 и ацетонитрил (метанол). В моем случае колонки хватало при интенсивной нагрузки (как реакционные смеси так и чистые вещества ) на 400-500 анализов, и потом только начинала наблюдаться ассемитрия пиков, после чего мы ее меняли на новую. Вещества детектировали при момощи диодноматричного детектора от 230 нм и выше, к сожалению ниже спуститься нельзя, так как данный ион-парный реагент сильно поглащает в области 190-230 нм. От ион-парного реагента отмыться будет не просто, даже если вы будите долго мыть сначало вода/ацетонитрил (40:60), а потом 100% ацетонитрилом, все равно все скорее всего не смоете. Также я в качестве ион-парного реагента использовал тетрабутиламмоний сульфат вместо бромида. Удерживание сульфокислот заметно уменьшается при использовании тетрабутиламмоний сульфата. Так что можно сказать что противоион в ион-парном реагенте существенно влияет на удерживание разделяемых веществ. В моем случае воспроизводимость времени удерживания была хорошей при применении изократического элюировани, при градиентном элюировании конечно похуже. Следует заметить, что емкость ион-парной хроматографии заметно меньше емкости обращенно-фазовой хроматографии, т.е. колонку легко перегрузить из-за чего наблюдается ассемитрия пика и ухудшение воспроизводимости времени удерживания. Так как в данном режиме ВЭЖХ смешанно реализуются два механизма: обращенно-фазовый и ионообменный (со всеми вытекающими отсюда последствиями). Запасную колонку всегда нужно иметь, так как колонка ВЭЖХ может выйти из строя не предупреждая. Вообще общее правило: 200-300 анализов и колонку надо менять. И это при том, что вы используете предколонку. Также сильно продлевает жизнь колонки в данном случае, ее промывка в конце рабочего для на ПФ состава ацетонитрил/вода (60:40) |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
19.11.2010 // 12:01:58
Опасности применения ТБА никакой нет. "Опасность" представляют длинноцепочечные высокомолекулярные ион-парные реагенты типа додецилсульфата натрия или ундецилтриметил аммония гидросульфата, которые сложно вымыть с колонки. А вот все низкомолекулярные типа ТБА довольно легко удаляются с колонок, достаточно промыть колонку подвижной фазой с рН, при котором отсутствуют молекулярные формы ион-парных реагентов , то бишь для ТБА (рН=3) и ацетонитрил 60 % , а затем уравновесить колонку необходимой другой ПФ. Я уже очень давно использую подобные ион-парные реагенты, без которых в фармакологии иногда не обойтись из-за сильно-полярных свойств разделяемых соединений. ТБА гидросульфат можно заменить на ТБА бромид, но нужно учитывать, что раствор ТБАБ имеет несколько большую оптическую плотность по сравнению с ТБАГС. ТБАБ нужно перекристаллизовать либо из спирта, либо из этилацетата, тогда оптическая плотность будет получше. |
|||||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
19.11.2010 // 12:18:47
Редактировано 2 раз(а) Из книги написанной Сычевым В качестве модификатора чаще всего применяется уксусная кислота (ее применение обязательно при разделении соединений кислого характера), реже – муравьиная кислота, вода. В случаях разделения сильнополярных веществ основного характера в качестве модификатора применяют алифатические амины (диэтиламин, триэтиламин) (рис. 3.3.4), комбинируют триэтиламин и уксусную кислоту; триэтиламин, уксусную кислоту и воду; применяют водные растворы ацетата аммония и т.д. При применении комплексных модификаторов следует помнить, что концентрация солей в неполярном элюенте должно быть минимальным. Даже если элюент выглядит гомогенным, соли могут выпасть в осадок на колонке. Так, при применении элюента гексан-изопропанол-вода- уксусная кислота-триэтиламин 60:40:2.5:0.75:0.2 для разделения азотистых оснований на силикагеле было замечено, что давление в системе непрерывно растет, и становится недопустимым всего через две недели работы. При этом эффективность и симметрия пиков оставались отличными. По всей видимости, выход колонки из строя был обусловлен выпадением в осадок на колонке ацетата триэтиламмония. Таким образом, для нормальной работы концентрацию уксусной кислоты и триэтиламина следовало бы уменьшить как минимум в десять раз. и далее по книге, только примеры на колонках скажем так не ровне вашей. сколько раз уже замечаю, что колонки с 2м и 3м эндкепированием практически никак не реагируют на модификаторы вроде триэтиламина и его родствнников. А как они прилипают к вашей колонке мне лично сложно объяснить, но вреда нанесут только если их "криво" использовать-образовывают комплекс, садятся и трындец-колонка с новыми характеристиками до скончания её эксплуатации-она вам надо? - это теория а реальная практика - МЕТОДИКА УСТАРЕЛА, ЭТА КОЛОНКА НЕ ТРЕБУЕТ ТАКОГО "ВНИМАНИЯ" !, те без модификатора вполне сойдет. Надо подумать, что можно - начните с метанол к воде 50 на 50), а потом метанол с 0.1% уксуснеой например) нашел для уридина аналогичная колонка - конечно если вам это дозволено... а модификатор в данном случае какой из этих не суть |
|||||
|
Андрейвладими Пользователь Ранг: 139 |
19.11.2010 // 12:19:54
Есть умеренный опыт йон - парной хроматографии с подобным реагентом и небольшие теоретические познания. 1 & 2) До конца отмыть колонку может и не получиться, слишком хорошо он там сидит. Колонка может поменять свойста и это почти необратимо. Воспроизводимые результаты при этом получать можно и после модификации колонки, но они могут отличаться от тех, которые были до использования тетрабутиламмония гидросульфата. Чем отмывать точно не знаю, можно кислым буфером, например TFA or H3PO4/вода/MeCN. Проверка завершения отмывки - должны перестать "плыть" времена удерживания кислот. Но они могут отличаться от времён "до модификатора" 3) Наверное да. 4) Да, повлияет, особенно на удерживание кислых веществ. Например Л.В. Сапрыкин "Высоко-Эффективная Жидкостная Хроматография" Харьков "Оригинал" 2007, стр 112, 126 и другие. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
19.11.2010 // 12:53:28
Редактировано 2 раз(а) Месяц спустя - 186 m/z [M+H]+  "Фонит" сам ВЭЖХ (без колонки), хотя сам канал и т.д. уже только чем не промывался (частые замены элюента). Понятно, что какие-то "следы". В общем, Вы можете забыть о ТБА, но это не значит, что он забыл о Вас.  З.Ы.: Хотя с тетрабутиламмонием, может все и по-другому. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
19.11.2010 // 15:04:44
Редактировано 3 раз(а) Можно, наверное, делать что угодно. Единственно, не наносите другой ион-парный реагент, например, поработали на ТБА - не понравилось - взяли ТЭА и т.д. Просто пики могут начать расщепляться. Были себе случаи.. А так никакой особо опасности. Эффективность - это опционально. Она может и улучшиться, кстати. Допустим, довольно сильная кислота, и даже при рН 2 хвостит.. а с ТБА есть шанс получить весьма приличный пик.. С фосфатами оснований - ТБА - это вообще классика.. Алексей, это ж не об этом, это ж о нормальной фазе, причем от безысходности - когда очень полярное вещество надо анализировать на хиральной колонке в нф режиме.. и вообще это очень старый мой текст, там все жутко плохо написано.. |
|||||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
19.11.2010 // 15:39:38
Редактировано 1 раз(а) не суть...главно что практически очень полезные вещи написаны. Кстати "добиваю" методику на тилозин без применения перхлоратов и др. солей. Добавил 10мМ ТЕА немного уменьшилось время удерживания, довел до 20мМ значительно уменьшилось время и немного лучше делится., Все это чудо при 55С на градиенте в смеси с ацетатом амония, ацетонитрилом и муравьиной кислотой. Колонка хорошая тройной эндкепинг, но боязно как бы не выпало ничего. И проблема - в фазе вещество нестабильно форма а быстро переходит в форму Б, а если растворит в метаноле или ацетонитриле-все слипается |
|||||
|
Jora Пользователь Ранг: 23 |
20.11.2010 // 8:12:31
Спасибо большое за внимание к теме и ответы! Все внимательно прочитаны и обдумываются. Надеюсь, у нас все получится! Если появятся еще подобные вопросы-будем задавать их в этой теме, если можно..
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
20.11.2010 // 8:15:11
Ну, не знаю.. я не люблю такие сложные составы городить.. по-моему, так это тяжкое наследие прошлых лет.. Может, я, конечно, зажрался из-за большого выбора колонок и знания их возможностей
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
20.11.2010 // 8:18:15
Ок! Одним словом - не пугайтесь, все делаете правильно. И вот еще вспомнил - обязательно поколите разные бланки, посмотрите на системные пики. Особенно если реагент - бромид.
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 61
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
