| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Опасность использования тетрабутиаммония гидросульфата на колонке С18 >>>
|
 |
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
 02.12.2010 // 1:38:17
Редактировано 1 раз(а) Кость., Маэстро,- метанол органика и ускоряет? Он же плотный зараза, и в данных да практически во всех условиях он значительно увеличивает время выхода и эффективность разделения, почему мне по душе сорбенты и системы стабильно работающие при высоком давлении больше 4000psi(300бар), во многом из-за метанола., мало того в метаноле очень долго хранятся разбавленные стандарты(большинство), и много др преимуществ. водно ацетонитрильная смесь проще и дешевле а тотальное использование обращенки в фарме тоже руководствуется универсальностью и ценой. Вот и отталкиваются специалисты от воды, недорогой органики и самых распространенных солей и кислот, ну и ионпарниками можно немного поиграться что там их нужно то. Методика должна быть всегда маленьким бизнес проектом, если называть это по современному. И, прошу прощения, размеры колонок и частиц я бы не рекомендовал так однозначно девелопментом можно и на других размерах, если с толком. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
02.12.2010 // 7:13:33
Редактировано 2 раз(а) Гм.. ну хорошо, по порядку..  Водку использую по причине экономической целесообразности. 125 рублей за 0.5л "Путинки" - и в руках 500 мл 40% этанола - хорошее и недорогое чистящее средство для ОФ колонок. По элюирующей силе, наверное, примерно как 60% ацетонитрила. Ну, а от примесей в водке все элементарно потом кондиционируется.. Дело не в метаноле, а в увеличении удерживания при увеличении доли органического растворителя. Конечно, лучше использовать ацетонитрил. Но такая закономерность говорит, прежде всего, о том (пардон, перейду здесь на свою "доморощенную" терминологию), что доминирующий тип взаимодействий здесь - нормально-фазовый. Т.е., фактически, на ОФ колонке ведется работа в режиме гидрофильной хроматографии (HILIC), только очень неэффективная. Если уж так, то лучше уж сразу взять ацетонитрил-вода 8:2, и использовать С18 как силикагель с на 80% ухудшенными характеристиками. Говорить об эффективности ион-парных реагентов тут тяжело потому, что мы не знаем эффективного заряда аналита при нейтральном рН. На вид по формуле - он должен быть почти нулевым: фосфат разменивается на четвертичный азот, и еще один "недофосфат" - на аминогруппу цитозина. То есть ион-парный режим не должен дать результата. Это мы и наблюдаем. ТБА - это сильный реагент, 10мМ при наличии единичного отрицательного заряда способно таких делов наделать, что пришлось бы %-тов 10 ацетонитрила добавлять, что вещество вообще появилось в прямой видимости. Но ничего такого не происходит. Значит - аналит практически нейтрален. Единственно, что остается - "раскочегарить" фосфаты по следующим ступеням и подавить ионизация аминогруппы, то есть увеличивать рН. Чего сделать на силикагеле толком нельзя. А соль - ее действие вообще здесь непредказуемо, т.е. если есть смесь механизмов.. могу показать "смешные картинки", когда собавление соли в "смешанном" режиме (формально- ОФ) раскидывает аналиты в разные стороны так, что только диву даешься. Но тут ничего странного нет - одно слово - смешанный режим. Ну, и нет ничего хуже, чем валидация методики на смешанном режиме. Потому как все эти разделения - нестабильные, и очень плохо воспроизводятся. Можно не обманываться, что методика "выходит" на вот этой самой колонке (ообенно - если одна колонка в наличии), и в это самое время (особенно- если колонка новенькая). Посмотрите - как она ведет себя хотя бы на трех колоноках разных производителей подобного типа. |
|||||
|
абр Пользователь Ранг: 910 |
02.12.2010 // 8:58:08
Редактировано 2 раз(а) Ферейновский спирт заметно дешевле и лучше 
|
|||||
|
абр Пользователь Ранг: 910 |
02.12.2010 // 9:05:20
НЕ НАДО!!! это горы бумаг и толпы бестолковых проверящих. |
|||||
|
MaestrO Пользователь Ранг: 130 |
02.12.2010 // 12:43:50
Константин, большое вам спасибо за развернутый ответ. Что вам следующую книгу писать - соберите сообщения с форума, отверстайте и всех делов Только на ozon разместите как и эту чтобы достать легко было. А то хотел собрать коллекцию книг всей компании СССР вот только вашу и купил((( Хроматограммы с применением соли и полученными интересными результатами, будьте добры выслать на мэйл 1292552{coбaчkа}mail.ru . Ну то что метанол органика сомнений нет. Но по элюирующей силе он слабее ацетонитрила ( в ОФ условиях, и при механизме удерживания за алкил радикалы ). Просто как добавляет его. Если был элюент скажем вода 80-ацетонитрил 20 и заменили на вода 80 - метанол 20 тогда удерживание возрастет. А если делают добавку за вычетом у водной части типа вода- ацетонитрил-метанол --- 75-20-5 тогда время выхода станет меньше. Ну а если просто добавить метанол в готовый элюент (одновременное уменьшение доли и воды и ацетонитрила), то было 80-20 стало 73-18-9 (к литру исходного добавили 100мл метанола) и время выхода уменьшится. Вообще меня смутило то, что при увеличении доли метанола дальше время сначало выросло до 3.5 мин, а с дальнейшим увеличением метанола уменьшилось до 3.2 мин. Для такой длинной колонки может это вообще случайну результаты и колебания. Тем более если она дважды эндкеппирована до HILICа не добраться. Возвращаясь к аналиту. В кислой pH фосфорные группы должны перейти в мол форму а азоты в ионизированную ( и их там много) . Может с ними SDS, или покороче чего-нить, будет взаимодействовать? |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Jora Пользователь Ранг: 23 |
02.12.2010 // 16:10:41
Уважаемый Константин! Спасибо за проявленное терпение и Ваши ответы! Мы дошли до осознания необходимости использования другого сорбента. Тогда возникают такие вопросы: 1. Какая из упоминаемых Вами колонок больше подойдет для решения нашей задачи - колонка с аминофазой, например, Luna NH2, или силикагель, например Luna HILIC? И какую фирму вообще лучше предпочесть? 2. Какая из колонок более универсальна (если предполагать использовать ее в дальнейшем для анализа полярных соединений - каких, пока неизвестно) PS Мы не обижаемся, мы думаем )Заранее спасибо! |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
02.12.2010 // 21:37:38
Редактировано 2 раз(а) Что вам следующую книгу писать - соберите сообщения с форума, отверстайте и всех делов Только на ozon разместите как и эту чтобы достать легко было. На озоне книжка есть - без проблем. Отверстать сообщения.. ну, направление мысли верное, стиль изложения я изменю, и резко - будет гораздо меньше "рассказов", все будет разбираться на примерах.. книга будет бесплатной, причем напечатанной (ну, и электронной).. Но это серьезный проект, несовместимый по качеству с "Практическим руководством.." Нужно приличные деньги, и их, в принципе, не отказываются дать - но пока все переносится на следующий год с формулировкой "пока неясен бюджет на следующий год". Так что.. Быстрее выйдет небольшое руководство по подготовке пробы для гх и вэжх.. наверное, к лету "Смешные картинки".. ээ.. оказывается, их верстать надо)) это целая серия хроматограмм.. проще рассказать "на пальцах": обращенка, кислая вода, вещества: 1. никотинамид, 2. аскорбинка, 3. лимонка, 4. пиридоксин; добавляем 50мМ фосфата, получаем 1. аскорбинка, 2. лимонка, 3. никотинамид, 4. пиридоксин, причем: 1. аскорбинка вообще не реагирует 2. удерживание лимонки резко уменьшается, она почти наезжает на аскорбинку 3. удерживание никотинамида резко увеличивается 4. удерживание пиридоксина капель-капельку увеличивается |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
02.12.2010 // 21:48:37
Редактировано 1 раз(а) Уважаемый Константин! Спасибо за проявленное терпение и Ваши ответы! Мы дошли до осознания необходимости использования другого сорбента. Тогда возникают такие вопросы: 1. Какая из упоминаемых Вами колонок больше подойдет для решения нашей задачи - колонка с аминофазой, например, Luna NH2, или силикагель, например Luna HILIC? И какую фирму вообще лучше предпочесть? 2. Какая из колонок более универсальна (если предполагать использовать ее в дальнейшем для анализа полярных соединений - каких, пока неизвестно) PS Мы не обижаемся, мы думаем )Заранее спасибо! Не знаю.. нечасто работал я в HILIC-e, причем давно, и только на стареньких 150х3 Separon NH2. Но они справлялись, вполне.. Наверное, я бы купил амин, а не силикагель.. не знаю почему.. правда.. может, подозреваю, но силикагель может хвостить? как в старые добрый времена? Сейчас у меня лежат две новенькие колонки 150x4.6 Reprosil Amino 3 um и 150x4.6 Halo HILIC 2.7 um. Собираюсь их потестить на новогодних. Результаты будут оглашены, так что.. не хочу здесь сильно об этом говорить - если Вам действительно эти результаты интересны - можете огранизовать темку на - я тогда спокойно детально отвечу |
|||||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
02.12.2010 // 21:50:29
О метаноле при обращенке: специально ошибочно отстраняю его от органики., тк по показателям полярности он очень близок к воде., и при этом обладает более высокой элюирующей силой, чем вода и лучшие результаты(для классических фарм аналитов) по эффективности получаются при градиенте вода(буфер)-ацетонитрил при постоянном метаноле., те на 3х каналах. Небольшое повышение метанола значительно повышает эффективность, дальнейшее повышение скажется в какой зависимости будем заменять ацетонитрил и воду в фазе, как уже сказано MaestrO. не практикую 100% водные фазы, но воду с метанолом на ура, 95 к 5 и если буду практиковать, то точно не на эклипсе ральные аплики с востока и там в апликашках иммено на дифосфат., он там тоже на мертвом... из нового это уже хилик кот я бы взял. Константину спасибо, Мастер! надеюсь в ближайшем будущем мне удастся до Вас добраться. последний пост ? 0_о Про GMP - считаю вполне оправданной бюрократией, да и наша нынешняя система ни чуть не меньше бумаги задействует, или кардинально снести и построить новое или планомерно готовиться., в первую очередь персонал потом снести и построить новое)) И слава богу что проверяющие бестолковые, а если будут толковые и ...честные?) |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
02.12.2010 // 22:04:11
Редактировано 1 раз(а) Ммм.. а я всегда думал - что более красивые пики на метаноле - признак хреновой неэндкеппированной колонки с плохим силикагелем  Не знаю, это уже больше смесь привычки и мистики - как два шамана бы спорили как лучше по бубну ударять, что духи были добрее Но давление на метаноле раза в 2 выше. Для меня это - критично. Это в два раза медленнее. Это даже не в два раза меньше денег - это хуже.. очень морально устаю от работы на приборе.. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 61
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
