| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Унос фазы с колонки >>>
|
 |
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
 28.03.2012 // 1:15:44
Редактировано 3 раз(а) Ещё раз перечитал ваши сообщения и как-то зацепился за это:
Если я правильно понял, колонка начинает у вас "фонить" после серии заколов дериватизированных образцов без сброса (если не так - поправьте), поэтому пока остановлюсь на следующих моментах... Возможно, как вариант, проблема именно в использовании режима Splitless - после закола часть образца садится уже в самом инжекторе и "фонит" при следующих заколах... Я бы всё-таки попробовал чередовать заколы плазмы без сброса и заколы растворителя со сбросом (к примеру, 2 мкл метанола со сбросом 150:1 в изотермическом режиме в течение минут 15 - температура термостата должна соответствовать максимальной в методе на плазму, чтобы не было длительной задержки между заколом плазмы и растворителя) - тем самым получим "отдувку-промывку" инжектора растворителем плюс дополнительное кондиционирование колонки после закола дериватов... Во время "промывки" растворителем НЕ ИСПОЛЬЗУЙТЕ Gas Saver - пусть инжектор нормально "продуется"... Ещё, как вариант, можно подумать об использовании вместо Splitless режима импульсного (Pulsed) ввода пробы, но это уже совершенно другая тема (тем более вряд ли вы захотите отходить от имеющейся утверждённой методики)... В общем, пока попробуйте использовать промывку между заколами и понаблюдайте, будет ли падение уровня нулевой до "нормального" значения... |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Marina_Kurkina Пользователь Ранг: 55 |
28.03.2012 // 8:50:17
Редактировано 1 раз(а) Вы не поверите, но я согласна многое попробовать, лишь прибор перестал дурить. Пробуем практически все, что тут советуют. Единственное, чтобы мне объясняли подробно, чтобы я понимала зачем... 
|
||
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
28.03.2012 // 9:39:43
Редактировано 2 раз(а) Так я, вроде как, объясняю что и зачем делать... Уж как могу Чтобы было понятнее - программа для промывки (ключевые моменты выделил): Для "ночной" промывки можете использовать тот же метод (как на картинке, приведенной выше) - только сократите время изотермы до 5 минут (думаю, этого будет достаточно для выхода растворителя) и установите Solvent Delay 4.8 минуты - т.е. на 0,2 минуты меньше времени всего анализа (в этом случае масс-детектор будет включаться только в конце анализа на 0,1 минуты - а он должен включаться, так как иначе метод вообще не запустится) - делать это целесообразно для того, чтобы экономить ресурс филамента (чего его впустую гонять)... И вот в этом методе ставьте на ночь серию заколов (30-40) растворителя(ей) - не забывайте контролировать состояние септы инжектора... |
||
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
28.03.2012 // 9:50:23
Как раз с прибором у вас, похоже, всё нормально... Нужно подбирать условия анализа... И, возвращаясь к ранее написанному, я ещё раз посоветовал бы вам проконсультироваться с коллегами по поводу объёма и концентрации вводимых проб - явно, что основная проблема в перегрузе - нужно или разбавлять образцы или колоть поменьше - здесь я вам не советчик, так как не в курсе, в каких концентрациях обычно содержатся интересующие вас компоненты проб... |
||
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
28.03.2012 // 10:00:27
Редактировано 1 раз(а) Кстати, чтобы проверить версию о том, что пробы у вас "застревают" в инжекторе, для начала, просто поменяйте лайнер - если нулевая после этого упадёт, значит так оно и есть... Возможно, есть смысл поменять тип используемого лайнера (например, вместо чашечного использовать прямой - в нём, по идее, пробы должны "оседать" меньше)... Кстати, случаем, не начались ли у вас проблемы после "случайной" смены типа используемого лайнера? |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Marina_Kurkina Пользователь Ранг: 55 |
28.03.2012 // 11:47:24
Редактировано 1 раз(а) Спасибо. Скажите еще, пожалуйста, если ставить кондишен на ночь при 300 градусах, то Gas Saver необходимо отключать? Лайнер меняли, но он из той же серии, что и предыдущий. У нас их 5 штук в упаковке было. Лайнеры прямые, не чашечные. Фонить начинает именно после вкола силилированных образцов. Для силилированных образцов используется система Split 70:1, объем вкола о,2 мкл. Затем вкол метилированных длинноцепочченых кислот (объем вкола 1 мкл), система splitness. Для каждого из экспериментов используется система Solvent delay. Я правильно поняла, что нужно попробовать уменьшить V вкола для длинноцепочечных кислот или попробовать систему Split? |
||
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
28.03.2012 // 12:03:12
На время серии - да, но чтобы всю оставшуюся ночь гелий не улетал понапрасну, для последнего закола в серии модифицируйте метод, включив Gas Saver - тогда после последнего закола и до утра ваш прибор будет работать в экономичном режиме... Если ночью ничего не колите, то лучше создать дополнительно и загружать на ночь парковочный метод (Parking), в котором поставить температуру термостата градусов 150-200 (чтобы держать колонку "в тонусе" - с утра она сразу будет готова к работе; при низких температурах, как многие любят оставлять, изменяются свойства фазы и первый закол может несколько отличаться от последующих), функцию Gas Saver ОТКЛЮЧИТЬ и выбрать режим Split со сбросом 3-5:1 - так можно ещё в 1,5-2 раза снизить расход гелия, когда прибор "отдыхает" (в режиме Gas Saver меньше 15 мл/мин установить нельзя )
|
||
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
28.03.2012 // 12:08:10
Редактировано 1 раз(а) Можете попробовать и уменьшение объёма вводимой пробы, и работу в режиме со сбросом, а также дополнительное разбавление образцов растворителем - попробуйте для начала, раз в 10 разбавить уже исследованный образец и проколоть его, сравнив затем с первоначальной хроматограммой... Если вы ничего не потеряете из интересющих компонентов, то зачем колоть больше... |
||
|
RedPepper Пользователь Ранг: 170 |
28.03.2012 // 12:36:59
Редактировано 1 раз(а) Кстати, вы уже что-нибудь пробовали делать из того, что я рекомендовал раньше? Напишите, пожалуйста - а то непонятно, есть какие-нибудь подвижки (даже отрицательный результат)... или я сам с собой тут разговариваю
|
||
|
Marina_Kurkina Пользователь Ранг: 55 |
28.03.2012 // 13:30:11
Редактировано 2 раз(а) Делали: меняла лайнер, септы и прочий расходник. Делала кондишен, не отсоединяв от МСД. Еще "мыла" колонку так: вкол гексана\метанола на методе, на котором я веду анализ длино-х кислот. Метод: 35 минут, 8 на отгон растворителя, затем нагрев печки до 300 градусов. Скорость 10 градусов в минуту. Скорость потока 1 мл в минуту. Так мне в службе поддержки посоветовали, но это еще Serga раскритиковал ранее. После кондишена и "мойки" был вкол 6 образцов мочи, затем силированные холестерины, затем 2 вкола длин-х кислот, потом 6 мочи. До этого все было терпимо. Во вторник вколола длинн-е кислоты и опять полет фазы. Интенсивность при последнем загрязнении дикая. В ночь с 26 на 27 отключали МСД, отсоединяли колонку, отрезали с обоих концов по куску. Отдувала ночь при 300 градусах 6 часов. Потом Autotuneю По нему все нормально. Вколола после этого образец мочи. Базовая сразу началась с 500 тыс,а потом плавно уехала под 6 млн. По поводу косячности методики. По алгоритму пробоподготовки с длинноцепочесными кислотами и орг к-ми в моче работают уже почти 5 лет. Не может методика начать косячить вот так с нуля. (это лишь мое мнение) По поводу моей криворукости. Я делала пробоподготовку для последних 2 образцов длин-х кислот под присмотром нашей бывшей сотрудницы, ушедшей на пенсию. Делала, как меня делала всегда сама. Она просто наблюдала, не помогала, не комментировала. В итоге сказала, что я делаю все правильно, как она сама и как она меня учила. Через пару дней я делала все сама. Фаза полетела опять. Методика пробоподготовки длин-х кислот в плазме. 1. В круглую коническую пробирку добавляю 150 мкл плазмы+по 100 мкл стандартов С19 и С27, перемешиваю, добавляю 2 мл смеси метанол:хлороформ 1:1. Оставляю на 30 минут, центрифугирую, снимаю супернатант. Добавляю смесь метано:хлоформ по аналогичной схеме. 2. Добавляю 1 мл 0,9% р-ра NaCl для удаления полярных липидов, перемешиваю, центрифугирую. Удаляю водный слой. 3. Сушу далее в азоте, добавляя смесь хлороформ:метанол 2:1 для полной отгонки воды. Высушиваем досуха. Далее метилирование на 3 часа при 80 градусах. 4. Затем экстракция 2 раза гексаном Высушиваю досуха, затем 150 мкл гексана, вкол. Методика проста до идиотизма. Вся посуда стекло, растворители перегнанные, все споласкивается чистыми растворителями перед тем как лезть в пробу, руки моются под 100 раз на день и прочее даже и распространяться не хочу. Но тем не менее косяк идет именно от ОДЦЖК. Есть еще идея, что в на колонку садятся метилированные полярные липиды. Что когда удаляю водный слой, то остаются остатки. Эта идея будет проверяться, если очищу колонку. Есть ли смысл теперь мыть колонку по описанному Вами методу или опять кондициционировать? Есть еще функция самоочистки источника иона прогревом. Описано в мануале. Стоит ли это делать? Или на все забить и вызвать сервисного инженера. Если можно, могу выложить приборные файлы и результаты автотюнинга. Выложу в нормальном виде. Интересно Ваше мнение. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 68
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
