Форумы ANCHEM.RU: Твердофазная экстракция - низкий процент извлечения

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Твердофазная экстракция - низкий процент извлечения >>>

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

19.09.2014 // 15:04:08

Serga пишет:

Dionisii пишет:
карнозин из биологических матриц ...
Картриджи - сильные катионообменники. И получаем процент экстракции - 15-20%.
Брать сильные катионообменники для первичной аминогруппы? Верх неразумности. Снять будет трудно. Посадить- легко. Я бы вообще стал связываться с ионным обменом в последнюю очередь, проверив сначала на патронах Strata-X или Oasis HLB.
Если покатит плохо, тогда попробовал бы слабый анионообменник (под СООН) группу, ну уж никак не сильный катионообменник для первичной NH2 или слабого плюса на имидазольном кольце.

Тут показано, как Waters подбирает SPE с ионным обменом:
www.waters.com/waters/ru_RU/Oasis-Sample-Extraction-Products/nav.htm?cid=513209&&locale=ru_RU

Если вкратце, то тебе надо пробовать слабый катионообменник (типа Оasis WCX или аналогичный) и после сорбции снимать 2% раствором муравьиной кислоты (подавляя заряд на сорбенте). На видео- самый правый из четырех протоколов.

Тут протокол, который автоматически сгенерил Феноменекс на сайте:

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

20.09.2014 // 7:26:24

Все эти автоматические "генераторы протоколов"- полная ерунда. Я вообще с трудом понимаю, по какому алгоритму оно работает.
Посуди сам.
Он предлагает тебе взять сильный катионообменник, сажать на него аминогруппу (рКа 9,51) и смывать аммиаком. Аммиак не способен эффективно "загасить" заряд "+" на боковой аминогруппе карнозина и тем более- сульфат на сильном катионообменнике, потому количественной элюции не будет.
Если он ориентируется на имидазольное кольцо, то это ничего не решает. Есть еще режим вытеснения аминогруппы катионом, но тут нужна большая концентрация NH4+ (или другого катиона), но элюция пойдет все равно медленно и неэффективно. Такое годится для ионообменной ВЭЖХ (да и то- дает поганые результаты), но не для SPE.
Второй протокол в твоем примере действует по все той же порочной схеме ионообменной ВЭЖХ с конкурентным элюированием, неэффективным для SPE.
Не надо изобретать велосипед. В приведенной ранее ссыли на видео от Waters все расписано предельно детально и ясно. Там используется более приемлемый для SPE принцип подавления заряда, либо на аналите, либо на сорбенте. Достаточно сместить рН на 1,5 единицы от рКа группировки (в нужную сторону) и элюция будет протекать практически количественно.

А автоматический протокол- это как автоматический перевод с иностранного языка- набор слов, а смысл непонятен или изменен на противоположный.

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

20.09.2014 // 17:07:59

Serga пишет:

Dionisii пишет:
карнозин из биологических матриц ...
Картриджи - сильные катионообменники. И получаем процент экстракции - 15-20%.
Брать сильные катионообменники для первичной аминогруппы? Верх неразумности. Снять будет трудно. Посадить- легко. Я бы вообще стал связываться с ионным обменом в последнюю очередь, проверив сначала на патронах Strata-X или Oasis HLB.
Если покатит плохо, тогда попробовал бы слабый анионообменник (под СООН) группу, ну уж никак не сильный катионообменник для первичной NH2 или слабого плюса на имидазольном кольце.
Тут показано, как Waters подбирает SPE с ионным обменом:
www.waters.com/waters/ru_RU/Oasis-Sample-Extraction-Products/nav.htm?cid=513209&&locale=ru_RU

Если вкратце, то тебе надо пробовать слабый катионообменник (типа Оasis WCX или аналогичный) и после сорбции снимать 2% раствором муравьиной кислоты (подавляя заряд на сорбенте). На видео- самый правый из четырех протоколов.

У меня есть Oasis HLB. Не посоветуете ли - чем посадть, чем смыть? И на какую pKa ориентироваться? У него ведь их три штуки.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

21.09.2014 // 12:03:21

Редактировано 1 раз(а)

Oasis HLB сажает на себя полярные соединения, у которых есть либо бензольное кольцо, либо гидрофобный хвост. Ионный обмен не катит. Поэтому просто пытаешься посадить из воды. Промывка водой и элюция- 80% этанолом (метанолом, MeCN, подбирай под свое вещество сам). При работе с сывороткой крови или плазмой сначала осаждаешь протеины трихлоруксусной кислотой или MeCN, разбавляешь супернатант водой (если с MeCN) и садишь на патрон.
Набивка в патроне набухает от этанола, после элюции и непродолжительного высушивания под вакуумом опять усаживается. "Притопчи" верхний фильтр и патрон опять готов к работе. Эффективность не теряется.
Если корпус у патрона полипропиленовый, будут заметные примеси, в том числе фталатов.

Если вещество не держится на HLB, придется воспользоваться слабым катионообменником типа Oasis WCX или Strata X-CW, садишь из разбавленной сыворотки в ацетатном буфере рН=4,5, сначала промываешь 5% NH4OH в воде, потом 100% метанолом (слезают слабые основания и жир

), элюируешь 2% НСООН в метаноле.

F251
Пользователь
Ранг: 41

21.09.2014 // 14:16:53

Serga пишет:
Набивка в патроне набухает от этанола, после элюции и непродолжительного высушивания под вакуумом опять усаживается. "Притопчи" верхний фильтр и патрон опять готов к работе. Эффективность не теряется.
Если корпус у патрона полипропиленовый, будут заметные примеси, в том числе фталатов.

На сколько анализов обычно хватает одного патрона (допустим, С18) при экстрагировании действующих веществ из растений? Как экспериментально это проверить? Где-то описаны практические аспекты работы с ТФЭ?

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

ВЭЖХ/МС Thermo Fisher Scientific Exactive™
Новый масс-спектрометр высокого разрешения, построенный на базе орбитальной ловушки Orbitrap™. Высокое разрешение, точное определение массы, быстрое сканирование делают этот прибор идеальным как для скрининга компонентов в сложных смесях, так и при исследованиях, требующих предельной точности анализа.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

21.09.2014 // 20:34:22

F251 пишет:

Serga пишет:
Набивка в патроне набухает от этанола, после элюции и непродолжительного высушивания под вакуумом опять усаживается. "Притопчи" верхний фильтр и патрон опять готов к работе. Эффективность не теряется.
Если корпус у патрона полипропиленовый, будут заметные примеси, в том числе фталатов.
На сколько анализов обычно хватает одного патрона (допустим, С18) при экстрагировании действующих веществ из растений? Как экспериментально это проверить? Где-то описаны практические аспекты работы с ТФЭ?

Полагаю, на один.

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

24.09.2014 // 7:28:03

F251 пишет:
На сколько анализов обычно хватает одного патрона (допустим, С18) при экстрагировании действующих веществ из растений? Как экспериментально это проверить? Где-то описаны практические аспекты работы с ТФЭ?

"Из растений" SPE едва ли пригодится. Для этого обычно устраивают препаративную колоночную хроматографию на силикагеле, выделяют фракции, которые потом чистят и исследуют.
Напишите (прямо из Инета) на любую фирму, вам пришлют море всевозможных буклетов по SPE (если вам лень читать на их сайтах и вы предпочитаете "твердый носитель"

).
Или ищите на их сайтах в инете. Сайт Феноменекса
www.phenomenex.com/
прямо начинается с предложения загрузить "постеры и гайды" практически на любую тему. В чем проблема?...
(А, ну да... Нужно только знать "вражеский" язык.

)

F251
Пользователь
Ранг: 41

24.09.2014 // 13:18:12

Редактировано 1 раз(а)

Речь идет о количественном определении с помощью ВЭЖХ отдельных веществ в растениях. Например, гедеракозида С в плюще или коричных кислот в эхинацее. ТФЭ здесь используется для очистки и концентрирования. Вопрос в том, можно ли использовать один и тот же картридж для нескольких анализов, и имеет ли кто из присутствующих на форуме подобный опыт. Очевидно, что производителям не выгодно писать подобную информацию в буклетах.
(Для меня и русский вражеский, но с пользой используем оба

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

25.09.2014 // 6:46:00

F251 пишет:
Вопрос в том, можно ли использовать один и тот же картридж для нескольких анализов,

Разумеется, можно.

Другой вопрос, сколько он проживет после ваших экстракций из растений? (Чего он там натянет- это отдельная песня

). Даже полимерный SPE можно забить с первого раза, он приобретет гнусный цвет, но работать все равно будет. SPE на основе силикагеля менее живучи.
Кто вам мешает проверить все экспериментально и самостоятельно, на своих образцах?

Dionisii
Пользователь
Ранг: 377

04.06.2015 // 12:13:05

Serga пишет:
Oasis HLB сажает на себя полярные соединения, у которых есть либо бензольное кольцо, либо гидрофобный хвост. Ионный обмен не катит. Поэтому просто пытаешься посадить из воды. Промывка водой и элюция- 80% этанолом (метанолом, MeCN, подбирай под свое вещество сам). При работе с сывороткой крови или плазмой сначала осаждаешь протеины трихлоруксусной кислотой или MeCN, разбавляешь супернатант водой (если с MeCN) и садишь на патрон.
Набивка в патроне набухает от этанола, после элюции и непродолжительного высушивания под вакуумом опять усаживается. "Притопчи" верхний фильтр и патрон опять готов к работе. Эффективность не теряется.
Если корпус у патрона полипропиленовый, будут заметные примеси, в том числе фталатов.

Если вещество не держится на HLB, придется воспользоваться слабым катионообменником типа Oasis WCX или Strata X-CW, садишь из разбавленной сыворотки в ацетатном буфере рН=4,5, сначала промываешь 5% NH4OH в воде, потом 100% метанолом (слезают слабые основания и жир ), элюируешь 2% НСООН в метаноле.

Маленький вопрос: как я понял - сажаю я из кислого буфера и элюирую "кислым" метанолом?


Ответов в этой теме: 40 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты