| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Ион-парная хроматография >>>
|
 |
| Автор | Тема: Ион-парная хроматография | |||||
|
Кирилл Пользователь Ранг: 40 |
 16.02.2006 // 13:29:09
Уважаемые коллеги. Подскажите,пожалуста книгу или ресурс в сети ( а если кто сам вкратце изложит - вообще буду признателен) где можно почитать об ион-парной хроматографии, о механизме действия противоионо. Читал Остермана, но этот вопрос у него как-то очень туманно. То есть, делали так-то и получили то-то, а почему - не ясно. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
16.02.2006 // 13:51:56
Здравствуйте, Кирилл, приходите на Аналитику Экспо, на стенде anchem.ru будет продаваться моя книжка, в которой все это написано. |
|||||
|
Кирилл Пользователь Ранг: 40 |
16.02.2006 // 14:49:50
Спасибо, приду конечно, только выставка через месяц а мне сейчас желательно. Может, можно ее так у вас купить, не дожидаясь выставки? |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1327 |
16.02.2006 // 15:09:01
Редактировано 1 раз(а) Стыскин, Ициксон, Брауде "Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография", Москва, Химия, 1986г. Стр. 97 - 106. Можно купить на CD в Элсико. Если этого мало - тогда к Леониду, он самый большой дока по изменению свойств сорбентов различными добавками. На этом сайте в журнале есть его статья по динамическому модифицированию. |
|||||
|
Кирилл Пользователь Ранг: 40 |
20.02.2006 // 12:40:02
Если нетрудно - ткните в меня ссылкой на статью - в упор не вижу. Вот ведь холера - эти ион-парные! Смотрите, если я правильно понял - эти противоионы вводятся с целью повысить гидрофобность образца для того, чтобы добиться лучшей посадки на колонку, так? А повышение гидрофобности достигается за счет того, что этот самый противоин, например анион ТФУ, будучи сам по себе гидрофобным, при посадке на положительный заряд пептида нейтрализует этот самый заряд т. е. ликвидирует "центр гидрофильности" , поскольку гидрофильность = полярность и определяется распределением зарядов в молекуле. рН, к слову сказать, в присутствие ТФУ будет за счет протонов кислым. Но, допустим, у нас в пептиде содержатся как положительные, так и отрицательно заряженные аминокислоты. Тогда, получается, что, во - первых, протоны будут садиться на отрицательно заряженные а.к. - и тогда рН у нас останется нейтральным. Все ли я правильно говорю? |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
20.02.2006 // 12:59:00
Редактировано 1 раз(а) там найдете книгу Стыскина Е.Л. в *.pdf формате. Но наверное, за денежки. А мыслите Вы в общем-то правильно, но есть особенности о которых Вам могут рассказать большие доки (Леонид Сапрыкин, Константин С...). Ион-парная хроматография - это некая реализация принципов ионо-обменной хроматографии на обращенке etc., не прибегаючи к специализированным колонкам. Фактически ион-парный реагент модифицирует например,С18, превращая ее в ионообменную (катионит или анионит по надобности). Если Вы собираетесь разделять вещества основного характера типа катехоламинов, витамина В1, В6 и.т.д. то в качестве противоионов используют гексил-, гептил-, октил- сульфонаты натрия (принцип сульфированных ионообменных смол), а если нужно определять вещества кислотного характера, то в качестве противоионов используют замещенные четвертичные аммониевые основания (типа тетрабутиламмония - , цетримида, ундецилтриметиламмония ...). Иногда прибегают к использованию солей хлорной кислоты (перхлорат лития). Обычно к ион-парной хроматографии прибегают при анализе ионобразующих соединений, которые в условиях обращенки разделить с приемлемым К уд. невозможно, либо нужно прибегать к рН, явно выходящим за рамки нормального для хром.колонок. Ион-парные реагенты позволяют увеличить коэффициент удерживания до приемлемых величин. В случае использования ТФУ при пептидном (белковом) анализе, то я полагаю, что это не связано с ион-парным механизмом (но, могу ошибаться). ТФУ всегда использовалась как раз для улучшения растворимости пептидов и денатурированных белков в водных растворах (а это уж скорее реакция подавления гидрофобности из-за маскировки гидрофобных участков). |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
20.02.2006 // 14:37:30
Ну я, как водится, успел только к шапочному разбору.   Кратко Игорь все достаточно просто объяснил. Кстати, книжку по ссылке можно скачать бесплатно. Ион-парному режиму и я уделил достаточно внимания в своей статье по динамическому модифицированию (на этом же сайте в журнале "Химический анализ"). Что касается использования в элюенте перхлората, трифторацетата, пентафторбутирата и некоторых других солей, то тут несмотря на отнесение некоторыми специалистами разделений в таких системах к ион-парному механизму, больше имеет место пересольватация как сорбата, так и гидрофильных центров сорбента с повышением гидрофильности образующейся НЖФ. Это позволяет подключить несколько другие типы взаимодействия вещества с сорбентом больше на основе распределительного механизма, чем ионо-обменного. Подробней о механизме действия липофильных анионов можно почитать в постах Евгения (Islander) в темах, посвященных ВЭЖХ анализу четвермичных аммониевых оснований различной структуры (в этом же форуме). По поиску найти их Вам труда не составит. |
|||||
|
Кирилл Пользователь Ранг: 40 |
20.02.2006 // 16:02:09
Редактировано 2 раз(а) Вопрос, наверное, тупой, но - каким образом ТФУ маскирует гидрофобные, т.е. неполярные участки? Ведь экранировать можно только связавшись с этим участком, а если он гидрофобен, то по определению не заряжен - за счет чего же образуется связь? То есть я понимаю, что посылка верна - тем более, что теория сходится с практикой У. меня был пептид, в котором бОльшая часть а.к. была полярной, и хроматограмка вышла прекрасная безо всякой ТФУ, а с ее добавлением пики съехали и вылез огромный фон - но подвести базу не удается Еще раз - простите за дурацкий вопрос. |
|||||
|
bf109xxl Пользователь Ранг: 1727 |
20.02.2006 // 16:20:44
По ссылке - неполная книжка (только 3 главы). Полная в И-нете имеется (как минимум, в djvu-формате). Ссылок намеренно не даю и сам не буду выкладывать по понятным причинам. Ищущий да обрящет... |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
20.02.2006 // 16:40:22
Редактировано 1 раз(а) А Вы задумывались о том, как жир отмывают мылом или другим детергентом ? Что происходит ? Детергент - это комбинация полярной (сульфированная часть, аммонийная) и неполярной группировки (С7,С8, и.т.д.). При ион-парной хроматографии, выражаясь фигурально, "жирный" хвост "фиксируется" С18- фазой , "выставляя" наружу сульфированные участки своей молекулы, обеспечивая поверхность ионообменными свойствами. Вот и у Вас с Вашим пептидом почти такая же ситуация происходит (лучше бы конечно о механизмах Вам почитать в статьях Леонида). Неполярные (гидрофобные) участки пептида экранируются неполярными F3C-C- группами ТФУ, "выставляя" к сольвенту карбоксилы. А пептиды можно делить и в других системах (без ТФУ), например 0,02 М триэтиламина фосфат рН 3-5. Да, а связь - Ван дер Ваальсова. |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
20.02.2006 // 21:01:50
Гарри, кажется кто-то что-то путает. Триэтиламин (даже и фосфат, да хоть и триэтаноламин) скорее сгодится для рН 7-9, чем для 3-5. Че за буфер такой? ТФУ- СF3COOH? Сильная кислота. Годится для удаления белков, остаются одни пептиды, оно разве с ними как-то взаимодействует? Да и маловато будет СF3 для сколько-нибудь серьезного гидрофобного взаимодействия. SDS- другое дело- вот кто лихо взаимодействует (да и то- с белком)... |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 41
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
