06.11.2017 // 14:10:26

---

vmu пишет:

---

Звезда пишет:
Берется исп (саше) переноситься в мерную колбу на 50 мл и растворяется в подвижной фазе. РСО берется навеска и переноситься в мерную колбу на 50 мл и также растворяем в п/ф. концентрации стараюсь соблюдать и делаю одинаковыми.

---

В какой ПФ растворяете? Вы порцию смеси 80/20 для растворения образцов отдельно готовите? Из вашего описания следует, что ПФ для разделения смешивается хроматографом из отдельных водного и органического компонентов. Концентрации веществ в анализируемых растворах какие? Уменьшить пробовали? Какие пики двоятся? Все?

---

06.11.2017 // 14:11:25

---

vmu пишет:

---

Звезда пишет:
Берется исп (саше) переноситься в мерную колбу на 50 мл и растворяется в подвижной фазе. РСО берется навеска и переноситься в мерную колбу на 50 мл и также растворяем в п/ф. концентрации стараюсь соблюдать и делаю одинаковыми.

---

В какой ПФ растворяете? Вы порцию смеси 80/20 для растворения образцов отдельно готовите? Из вашего описания следует, что ПФ для разделения смешивается хроматографом из отдельных водного и органического компонентов. Концентрации веществ в анализируемых растворах какие? Уменьшить пробовали? Какие пики двоятся? Все?

---

06.11.2017 // 16:05:16

---

Звезда пишет:
Имеется методика, которая хорошо себя зарекомендовала при количественном определении моего фенилэфрина в аналогах (тоже имеют 4 активных компонента в составе).

---

07.11.2017 // 4:44:27

---

Звезда пишет:

---

Шушечка пишет:
Прочтите внимательно методику в Европейке... особенно обратите внимание на колонку.

---

Здравствуйте! Благодарю ВАС за доброжелательность в мой адрес. я попробую еще раз изложить суть проблемы. имеется препарат в его составе 4 активных вещества: парацетамол, аскорбинка, фенирамин малеат, фениэфрин гидрохлорид. и вспомогательные: сахароза,лимонная кислота безводная, натрия цитрат дигидрат, натрия сахарин, ароматизатор сухой. Имеется методика, которая хорошо себя зарекомендовала при количественном определении моего фенилэфрина в аналогах (тоже имеют 4 активных компонента в составе). Методика следующая: Берется исп (саше) переноситься в мерную колбу на 50 мл и растворяется в подвижной фазе. РСО берется навеска и переноситься в мерную колбу на 50 мл и также растворяем в п/ф. концентрации стараюсь соблюдать и делаю одинаковыми. Подвижная фаза приготавливается из буфера и ацтонитрила в соотношении (80:20). Приготовление буфера: берется 3,25 гр натрия октансульфоната в колбу на 1000 мл и разводиться водой. далее подводим рН буфера до 2,8. Условия ВЭЖХ: температура колонки - 45 С, поток - 1 мл/мин, Обьем ввода - 10 мкл, Длина волны - 215 нм, П/Ф ставлю на градиент : порт С(ACN) 20% - порт D( буфер с рН 2,8). колонка Supelco ( Ascentis C18. cat#581324-U).
На выходе получаю раздвоенные пики или пик аскорбинки накладывается на пик фенилэфрина (это понятно при раздельном прогоне обоих стандартов).
Если кто имеет опыт, пожалуйста подскажите как подкорректировать методику, чтобы разделить пики или если есть возможность, предложите другие условия. Заранее спасибо!

---

07.11.2017 // 4:51:38

---

Звезда пишет:

---

vmu пишет:

---

Звезда пишет:
Берется исп (саше) переноситься в мерную колбу на 50 мл и растворяется в подвижной фазе. РСО берется навеска и переноситься в мерную колбу на 50 мл и также растворяем в п/ф. концентрации стараюсь соблюдать и делаю одинаковыми.

---

В какой ПФ растворяете? Вы порцию смеси 80/20 для растворения образцов отдельно готовите? Из вашего описания следует, что ПФ для разделения смешивается хроматографом из отдельных водного и органического компонентов. Концентрации веществ в анализируемых растворах какие? Уменьшить пробовали? Какие пики двоятся? Все?

---

Здравствуйте! Растворяю в ПФ : ацетонитрил:буфер , как я выше писала, а для образцов готовлю отдельно,на приборе да смешивается хроматографом. Концентрации веществ получается: в исп ( аскорб к-та- 0,5 мг/мл, фенилэфрина г/х – 0,01 мг/мл) РСО: аскорбиновой кислоты – 0,5 мг/мл, для фенилэфрина г/х – 0,01 мг/мл, конц . я подгоняю под испытуемый образец. Пики не то чтобы двоятся в испытуемом не разделяются так как вещества аскорб. К-ты и фенилэфрина г/х выходят практически в одно и тоже время, это стало понятно при отдельном прогоне стандартных образцов. Вы предлагаете уменьшить концентрации, я не думаю что это поможет просто вещества фенилэфрина г/х и так 10 мг в исп.образце))) . Можете еще что нибудь посоветовать ! Пожалуйста! Заранее спасибо!

---

13.11.2017 // 9:03:24

---

Шушечка пишет:
ПРопал ТС куда то)) чем дело то кончилось?))

---

13.11.2017 // 9:05:30

---

vmu пишет:

---

Звезда пишет:
Имеется методика, которая хорошо себя зарекомендовала при количественном определении моего фенилэфрина в аналогах (тоже имеют 4 активных компонента в составе).

---

Вы воспроизводите условия разделения рабочей методики в точности, включая марку колонки? Если есть методика, которая позволяет разделить фенилэфрин и аскорбинку в аналогичных препаратах, то и с вашим препаратом принципиальных проблем быть не должно. Может быть, у вас просто колонка уже убитая? Возьмите такую же, но новую. Еще вариант - попробовать на другом хроматографе.

Попробуйте поиграть с соотношением количеств ацетонитрила и водной части в ПФ (начальное соотношение, профиль градиента). Снижение pH до 2.1 вряд ли сильно скажется на разделении, но можно попробовать. При pH 2.8 аскорбинка с pK_a 4.1 уже на 95% в нейтральной протонированной форме, необходимой для нормального удерживания обращенно-фазовым сорбентом.

Можно поиграть с концентрацией октансульфоната. Кстати, вы берете именно то, что прописано в методике? В методике из Европейской фармакопеи - те же 3.25 г на 1000 мл, но там указано: октансульфоната натрия моногидрат.

Можно попробовать изменить темпертуру колонки. Не самое эффективное средство, но простое и иногда помогает. Можно сменить марку колонки: на этой C18 не делится - на другой C18 может поделиться.
Еще один более-менее радикальный вариант - сменить ион-парный агент, например на гептансульфонат или лаурилсульфонат.

Варьирование концентрации и природы ион-парника - наиболее эффективный способ достичь разделения проблемной пары веществ, поскольку указанные параметры будут влиять на удерживание фенилэфрина (положительные ионы) и практически не влиять на удерживание нейтральных при низком pH молекул аскорбинки.

---

13.11.2017 // 11:39:47

---

Звезда пишет:

---

Шушечка пишет:
ПРопал ТС куда то)) чем дело то кончилось?))

---

Здравствуйте! то что вы советовали еще не испробовала, в ближайшие дня сообщу, мне тоже интересно как пойдет процесс))) спасибо вам, я отпишусь))

---

  Ответов в этой теме: 24
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему