Форумы ANCHEM.RU: Лигандно-обменная хроматография

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Лигандно-обменная хроматография >>>

  Ответов в этой теме: 50
  Страница: 1 2 3 4 5
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Лигандно-обменная хроматография

Denischen
Пользователь
Ранг: 19

21.02.2006 // 18:45:48

Всем доброго времени суток!
Тут такое дело: надо работу выполнить по теме лиганднообменная хроматография, если конкретнее, то разделение моносахаров, фенолов на катионнообменнике (КУ-2-8) в кальциевой форме (КУ-2-8 сополимер стирол-дивинилбензола – 3-х мерная матрица с привитыми сульфо-группами). Суть проблемы в том, что нету удерживания этих самых сахаров, фенол сидит немного, то есть выходит всё же не в мертвом объёме (вероятно из-за сродства к кольцам матрицы), а вот сахара никак. Может кто сталкивался с этой проблемой или видел где-то что-то подобное а то мы тут уже с ног (и с клавиатур) сбились в поиске...
В обсчем помогите кто чем может...
Заранее спасибо...

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

22.02.2006 // 8:19:18

Из методички к лабораторной работе по углеводам:

Для концентрирования, идентификации и количественного определения смесей моносахаридов используют лигандный обмен на катионообменных смолах в Li+, K+, Ca2+, Ba2+, La3+, Ag+ - формах и на анионообменных смолах в боратной форме. Хроматография на катионообменных смолах в Са2+ форме становится стандартным методом определения смесей сахаров и полиолов в вине и пивном сусле. Хроматографическое разделение проводят при повышенной температуре (50-85 оС), для улучшения формы пиков. Разделение углеводов основано на различии в устойчивости комплексов полиолов и углеводов с катионом металла, связанным с ионообменной группой смолы.
Механизм разделения включает лигандный обмен: молекула полигидроксильного соединения обменивается с молекулами воды в конкуренции за противоион смолы. Сила взаимодействия связана со способностью гидроксильных групп образовывать координационные связи. Использование анионообменных смол в боратной форме связано с устойчивостью комплексов, образуемых борат- ионами и цис- гдроксигруппами, ионной силой и рН среды. Разделение происходит при 50 оС элюированием буферными растворами с увеличивающимися концентрациями бората (0,1  0,2 М).

Для концентрирования, идентификации и количественного определения удобно использовать катионит КУ-2-8 в Са2+- форме. Для этого катионит вначале переводят в Н+- форму, а затем в Са2+- форму и заполняют им колонку (10 х 150 мм).
Через катионит в Са2+- форме пропускают раствор, содержащий сумму моносахаридов (обычно берут 2- 2,5 мл экстракта). При этом происходит удерживание углеводов на сорбенте за счет образования комплексных соединений углеводов с ионами кальция различной устойчивости. Десорбция углеводов с колонки осуществляется пропусканием воды, в результате чего происходит обмен углевода на молекулы воды, в соответствии с устойчивостью комплекса «углевод- ион кальция». В процессе элюирования собирают вытекающую из колонки жидкость (элюат) порциями по 1 мл и в каждой определяют содержание углеводов (оптическую плотность) по фенолсернокислотному методу. Это дает возможность построить профиль элюции углеводов. Наблюдающиеся на нем пики углеводов можно идентифицировать по стандартным углеводам, подвергаемым хроматографическому разделению в тех же условиях (концентрация стандартных веществ в пробе 40 мкг/мл). По объему элюирования идентифицируют собственно моносахарид, а по величине пика- его концентрацию.

Сам я это, естественно, не делал.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

23.02.2006 // 22:45:02

Эх, господа-товарищи... как говорится, стали жертвами неудачного названия.

Начнем с того, что это не адсорбционная хроматография, а ЭКСКЛЮЗИОННАЯ... это значит, что сахара НЕ УДЕРЖИВАЮТСЯ, но только каждый - в большей ли меньшей степени. Для осуществления таких разделений нужны высокоэффективные колонки, заполненные, к примеру, 7-8 микронником..

А Вы - КУ-2!!! Родные, вы что?

Denischen
Пользователь
Ранг: 19

24.02.2006 // 7:20:25

То есть дело не в моих кривых руках. Ура, это немного поднимает мою самооценку. Но как же тогда методичка по лабораторным работам, про которую говорил Serga. Мы же по ней всё и делали. Неужели это из серии "научная фантастика"

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

24.02.2006 // 8:46:38

Да, это не есть научная фантастика. В российских условиях многие, полагаю, делают, как описано в методичке (не сами же они ее выдумали). Механизм разделения, во всяком случае, известный. Возможно, вы не перевели смолу в активную форму (Н+), после чего только она способна перейти в более стабильную Са2+ форму. Может, поток элюента был слишком быстрый. Как вы детектировали углеводы?
На этой схеме изготавливают и колонки для ВЭЖХ.
Что касается меня, я тоже считал КУ-2-8 анахронизмом, и лично эти методы не воспроизводил (но у нас хоть система ВЭЖХ имелась). За неимением полимерных сорбентов, специально разработанных для лигандного обмена углеводов в ВЭЖХ (я имел дело с Waters, термостат которого не позволяет взгревать выше 60, а рабочая температура колонок 80-90), моносахариды делил на обычном силикагеле с привитой аминофазой. При нормально-фазовом градиенте (95%/5% MeCN/H2O- 100% H2O), DAD 195 nm(dRI тут не годится, а ELSD, как вы уже догадались, не было, да и "текущая" в таких анализах аминофаза на нем сильно шумит). Порядок выхода- моно-, ди-, три-, олиго- и полисахариды. Моно- и ди- еще можно разобрать, а остальное уже идет чохом.

Denischen
Пользователь
Ранг: 19

24.02.2006 // 12:38:07

я понимаю конечно все дело в различной устойчивости взаимодействия металлов и лигандов но если какие-нибудь теоретические выкладки на которые операется сей способ разделения. На данный момент я сделал экстракт одного из растений с целью выделения суммы углеводов, перевел КУ-2-8 в кальциевую форму и попытаюсь разделить(идентификация фенолсернокислотным методом) если что-нибудь получится напишу.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательная камера UT-1050А
Используются для моделирования условий окружающей среды при проведении самых сложных испытаний, стандартных тестов и испытаний на старение материалов. Объем камеры 50 л. Температурный диапазон: от -20 до +100°С. Диапазон влажности: 45-98 %RH. Возможность установки 10 программ до 10000 циклов.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

24.02.2006 // 16:21:42

Послушай, просто экстракт тянет из растений все подряд- всякую органику в гликозидах и пр. пр. Вы проводите групповое выделение углеводов или как? А на стандартной смеси?
Да и какие еще теоретические обоснования нужны? Есть они, конечно. Только объяснять долго.

Denischen
Пользователь
Ранг: 19

25.02.2006 // 21:22:13

буду благодарен если напишите как лучше тянуть(сумму углеводов)(заранее спасибо Serga за участие..) я так понимаю почитав предыдущее работы. Сумма углеводов переходит в воду с помощью ультразвук экстракции(на данный момент я это сделал затем сконцентрировал до минимального объема пока на этом все, возможно что то надо сделать по другому)??? А как стандарт построен (предыдущим поколением) график градуировачный по глюкозе. Хотя конечно как я понимаю надо бы по всем веществам предполагаемым строить отдельно...

Serga
Пользователь
Ранг: 1806

26.02.2006 // 6:29:48

Я не спец по выделению и разделению углеводов из растительного сырья, но начальный ваш этап верный (водная УЗ-экстракция). Кроме углеводов при этом тянется еще уйма гликозидов, создающих проблемы при анализах. Впрочем, я постараюсь кинуть ссылку на схему выделения углеводов.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

26.02.2006 // 16:46:25

Не хочу показаться снобом, но большинство постов Serg-и грешат явными ошибками.

Korvet
Пользователь
Ранг: 1114

26.02.2006 // 20:59:51

Я так думаю, что те теоретические выкладки о которых интресовался Denischen, как раз касаются возможности разделения сахаров на этом КУ-КУ-2-8. Если та же глюкоза смывается сразу в мёртвом объёме и с нею ещё все возможные сахара какой смысл делать экстракты. Если просто у системы не хватает эффективности, чего же сырьё переводить. Метод. рекомендация конечно хорошо, но на заборе тоже написано... Что интересно всякие гликозиды то может и будут немного удерживаться за счёт взаимодействия несахарной своей части со скелетом этого КУ-КУ.


Ответов в этой теме: 50 Страница: 1 2 3 4 5 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты