| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » Персональные форумы ... |
 |
Жидкостная хроматография и смежные методы (Liquid chromatography and related techniques) >>>
|
 |
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
 11.11.2005 // 13:26:33
Таня, если колонка новая (наверное, вам ее поставили в комплекте к шимадзу - мое предположение), то быть такого, скорее всего, не может. Я бы вначале начал подозревать пробу - действительно ли сигнал соответствует белку. Может, он на месте, просто его мало? А на нуле - продукты гидролиза? Если в образце уверены, то лучше хоть у кого-то стрельнуть любую другую обращенку и вколоть там. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Tanya Пользователь Ранг: 28 |
14.11.2005 // 5:59:30
Спасибо, попробую. |
||
|
АнтонА Пользователь Ранг: 211 |
14.11.2005 // 12:13:52
Благодарю! Но хочется заморочится в ручную, т.е. сначала на СФ замерить весь Hb, а затем из него вычесть неGHb, который по идее должен зацепиться за смолу. Какую смолу или ТФЭ взять? |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
15.11.2005 // 13:09:54
Думаю, без хроматографа ничего не получится... правда. |
||
|
Малой Пользователь Ранг: 50 |
30.11.2005 // 21:52:11
Для чего используются добавки в элюент модификатора ну например гексан-ИПС-100-1 или метанол-вода-гексан-80-20-1 Это что реально чтота дает? и что? |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
01.12.2005 // 10:03:55
Редактировано 1 раз(а) Поскольку вопрос простой, возьму труд на себя ответить отрывком из своей же книги, освободив Константина от объяснения элементарных вещей. "Если в распоряжении хроматографиста уже есть колонка, заполненная определенным типом сорбента, единственным средством регулирования удерживания компонентов пробы является состав элюента. В качестве элюента могут выступать органические растворители, их смеси, водные растворы органических и неорганических веществ. Каждый растворитель обладает по отношению к конкретному типу сорбента определенной элюирующей силой, под которой понимают способность данного растворителя вымывать (десорбировать) с данного сорбента разделяемые вещества. Для каждой хроматографической системы растворители по возрастанию или убыванию элюирующей силы можно расположить в элютропный ряд. Казалось бы, учитывая то многообразие органических и неорганических веществ, которые можно было бы использовать в качестве растворителей, всегда можно подобрать некое вещество, обладающее в данной хроматографической системе подходящей элюирующей силой. Тем не менее, в практике хроматографии использование элюентов, состоящих из одного растворителя - явление крайне редкое. Этому есть несколько причин. Во-первых, некоторые вещества сложно использовать в качестве растворителей ввиду их высокой стоимости, токсичности, химической нестойкости или агрессивного воздействия на элементы хроматографической аппаратуры. Во-вторых, препятствием к использованию в качестве компонентов элюента некоторых растворителей является совокупность их физических свойств, например, высокая вязкость, обуславливающая применение неприемлемо высокого давления на входе в колонку для создания оптимальной скорости протока элюента через слой сорбента. Целый ряд ограничений для использования растворителей в колоночной ЖХ накладывают и способы детектирования веществ, выходящих из колонки. Таким образом, круг применимых в практике колоночной ЖХ растворителей сужается примерно до двух - трех десятков. И, наконец, может так оказаться, что требуемая элюирующая сила находится в промежутке между силами двух рядом расположенных в элютропном ряду растворителей. Именно из-за совокупности этих причин в качестве основы элюента чаще всего используют смесь двух растворителей – с заведомо более слабой (растворитель А) и с заведомо более сильной (растворитель В) элюирующей силой, чем это необходимо для данного хроматографического разделения. Компонент А обеспечивает преимущественно транспортную функцию для перемещения в колонке уже десорбированного вещества, компонент В, напротив, являясь конкурентом разделяемых веществ в сорбционных процессах, может их вытеснять с сорбента в объем элюента и, тем самым, значительно уменьшать их время удерживания. Увеличивая долю компонента В в растворителе А, можно плавно менять элюирующую силу этой смеси и добиться практически любой ее величины в промежутке элютропного ряда от А до В. Сразу же следует оговориться, что один и тот же растворитель, в зависимости от типа применяемого сорбента, может быть как сильным элюентом, так и слабым. Кроме того, смеси разных растворителей при одинаковой элюирующей силе могут обладать различным воздействием на селективность разделения данной пары веществ. По этой причине иногда часть одного сильного компонента заменяют на другой, также сильный компонент, но с другой селективностью, и элюент получается уже трехкомпонентным. Однако, на практике необходимость в этом возникает достаточно редко." |
||
|
Малой Пользователь Ранг: 50 |
01.12.2005 // 17:51:22
Вы меня не совсем поняли. Я это читал и вобщем знаю, но вопрос такой. Если мы берем смесь гексан-ИПС(EtOAc)-100-1 неужели это будет оличатся от простого гексана. Я ведь почему спрашиваю, потому что на практике это не заметно. Вы пример можете привести, где это важно? Другое дело конечно для обращенки, где добавляя воду к метанолу или ацетонитрилу резко может менятся растворимость органики и то обычно смеси проверяют например 100, 95-5, 90-10 и тд. |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
02.12.2005 // 8:28:02
Редактировано 1 раз(а) Вообще то ИПС в данном случае играет роль сильного компонента. Все зависит от разделяемых веществ (сорбатов). Даже если удерживание на чистом гексане и на гексане с 1% ИПС различается мало, добавка полярного модификатора значительно ускоряет установление равновесие силикагеля с элюентом и стабилизирует время удерживания. И вообще не рекомендуется работать на чистом гексане в НФ режиме с силикагелем из за нестабильности свойств такой хроматографической системы. Более подробно об этом можно почитать у В.Д.Шатца. В одной из тем было несколько ссылок на электронную версию этой книге в интернете. |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
02.12.2005 // 16:10:29
Да, извините, но Вам надо почитать о хроматографии поподробнее. 1% изопропанола в гексане для нормальной фазы - весьма мощная добавка, уменьшающая время удерживания. Добавление же гексана в орг.растворитель в обращенке - экзотика, причем плохо работающая. От безысходности ее иногда применяют при анализе жиров. |
||
|
Малой Пользователь Ранг: 50 |
02.12.2005 // 18:28:17
Спасибо за ответы. Да насчет добавки гексана в смесь для ОФХ это я перепутал сам не встречал такого. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 401
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
