| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » Персональные форумы ... |
 |
Жидкостная хроматография и смежные методы (Liquid chromatography and related techniques) >>>
|
 |
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
 07.12.2006 // 18:24:19
Добрый день, Мадест. Не соврали  Головной офис СибТеха действительно в Омске, они наши дилеры также в Новосибе и Томске. К Вам приходил, наверное, Сальников Валерий Сергеевич.Представительства SGE действительно нет, а эксклюзивными дилерами по России является Найтек. Если есть какие-то вопросы по продукции, методикам и т.д., это можно ко мне, без проблем. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Viriya Пользователь Ранг: 5 |
20.03.2007 // 11:08:28
Редактировано 3 раз(а) Добрый день! Необходимо разделить половые стероидные гормоны в сыворотке крови крыс("сборная солянка" из свободных форм андрогенов, а также эстрон и эстрадиол, прогестерон). Имеется в наличии: Agilent HP 1100; с диодноматричным детектором, а также FLD;колонка Zorbax SB-C18 3*150 мм, 5 микрон. Предполагаемые условия разделения: 60% ацетонитрила/40% Н2О (подкисленной фосфорной кислотой до pH=4)в изократе; на двух каналах регистрации 244 и 280 нм (в УФ - диапазоне). При этих условиях не выходит холестерол и дегидроэпиандростерон, хотя хотелось бы и их обнаружить. Подскажите, пожалуйста, оптимальный способ пробоподготовки для этих стероидов. Мой способ включает в себя предварительную экстракцию пробы гексаном, с последующей двухкратной экстракцией дихлорметаном, а также отмывкой щелочью и водой. Очень трудоемкий процесс. |
||
|
DSP007 VIP Member Ранг: 2228 |
20.03.2007 // 16:07:23
Редактировано 1 раз(а) Ну очень очень неплохо для начала. Холестерин на УФ детекторе точно не увидите, нет хромофорных группировок. Был бы масс- другое дело. А так из доступного для количественного определения холестерина - ГЖХ на FFAP после дериватизации. Белки крови чем осаждаете ? Не жирно ли будет для крысиной крови использовать твердофазную экстракцию? Удобно , но разоритесь на патронах очистки. Только если самому перенабивать и регенерировать. Отмечу, что в данной ситуации возможно будет более удобна нормально-фазная хроматография. Правда не на чистом непривитом силикагеле, а на "Нитриле" или "С1" ( у нас такие колонки- производства Биохиммак-СТ используются достаточно активно, и показали себя неплохо) |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
22.03.2007 // 0:54:14
Пардон, что встрял, но хочется задать вопрос, на каком концентрационном уровне Вы все это хотите обнаруживать? Возможно я ошибаюсь, и у крыс оно иначе, но у людей эндогенные уровни этих гормонов слишком низки для определения с помощью ВЭЖХ-УФ. Или Вы их гормонами намерены подкармливать? |
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
22.03.2007 // 9:57:06
Я тоже встряну, поскольку несколько не согласен с DSP. Без ТФЭ в данном случае просто не обойтись. И не потому, что пробу нужно чистить, а больше из-за того, что аналиты нужно концентрировать как минимум на порядок. А уж стоимость патронов все равно будет меньше, чем стоят растворители, реактивы и время, необходимое для проведения концентрирования другими методами. А если нет ВЭЖХ-МС, то и дериватизация может потребоваться, например, под флюориметрический детектор. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Viriya Пользователь Ранг: 5 |
22.03.2007 // 13:20:18
Редактировано 1 раз(а) Спасибо, что откликнулись. Извините, внесу коррективу, не холестерин, а холестерол. У меня вообще-то, имеется в наличии сигмавский стандарт. Прекрасно растворимый в метаноле (где в принципе и храню "матрицу"), но при внесении в элюент, содержащий воду, для получения вводимого образца, он очень некрасиво выпадает в осадок. Спрашиваете, чем осаждаю белки? А все тем, же гексаном. Где-то откапала, что это освобождает образец от эндогенных липидов и, по всей видимости от белков. Интересно, а чем нормально-фазная удобней? Насколько я встречала в литературе, ВЭЖХ пол. гормонов проводят в ОФ. |
||
|
Viriya Пользователь Ранг: 5 |
22.03.2007 // 13:22:42
Пардон, что встрял, но хочется задать вопрос, на каком концентрационном уровне Вы все это хотите обнаруживать? Возможно я ошибаюсь, и у крыс оно иначе, но у людей эндогенные уровни этих гормонов слишком низки для определения с помощью ВЭЖХ-УФ. Или Вы их гормонами намерены подкармливать? На уровне nM/l. |
||
|
Viriya Пользователь Ранг: 5 |
22.03.2007 // 13:39:04
Редактировано 1 раз(а) Уточните,пожалуйста, на сколько проб хватает одного патрона? Как в случае с ТФЭ строить калибровку? Если не ошибаюсь, необходимо учесть коэффициент потерь. А дериватизировать эти самые половые гормоны лучше чем? Если вы располагаете более подробной информацией, пожалуйста, напишите: Viria{coбaчkа}tyt.by |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
23.03.2007 // 2:25:45
И что, Вы всерьез надеетесь обойтись УФ-детектором? Или вы бедных тваерй собираетесь забивать и экстрагировать всю кровь? А флуориметрический детектор у Вас есть? Если есть, то можно эстрогены дериватизировать дансилхлоридом, а кетостероиды - дансилгидразином, но хроматографическая задача после этого весьма нетривиальная... Если хотите мое мнение - то Ваша задача - для LC-MS (см. ) |
||
|
Viriya Пользователь Ранг: 5 |
27.03.2007 // 11:05:11
Редактировано 4 раз(а) LC-MS у нас к сожалению нет,  а FLD, как вы правильно заметили, есть. Определить необходимо преимущественно андрогены. Чем их необходимо дериватизировать? Уважаемый Islander! Объясните, пожалуйста, какая в этом случае нужна пробоподготовка?
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 401
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
