| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » Персональные форумы ... |
 |
Любые вопросы по "Милихромам" и межмолекулярным взаимодействиям в ВЭЖХ >>>
|
 |
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
 25.09.2003 // 14:31:00
Косте: мы и так уже много места заняли нетематическими вещами. Если есть желание и спрос - можно открыть тему по ИВА или вообще по электрохимическим методам анализа и детектирования. Я довольно плотно этим занимался одно время. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
25.09.2003 // 14:42:11
Андрей! Такие вещи при некоторых рН склонны к образованию цвиттер-ионов и сильно меняют липофильность, поэтому рН нужно стабилизировать (буфер), в зависимости от рН это соединение будет проявлять преимущественно кислотные или основные свойства, вот тогда и применяй тот или иной тип ион-парного модификатора. Только не переборщи, при концентрации ПАВ в элюента более 1 милимоля на литр можно попасть в мицеллярный режим хроматографирования, а он почти наверняка тебе не нужен. |
|||||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
25.09.2003 // 15:05:22
Леонид, плиз! Можно по подробней об ион-парной хроматографии. Как там все стыкутся (рН, конц. ион-парного реагента, выбор буфера, сорбент колонки). У меня были серьезные траблы при определении водорост. витаминов , В6 имел размазанный тыл, а В1 - размазанный фронт. Условия такие: колонка - С8 (8х4,6х3), элюэнт - метанол15%/10мМ раствор октилсульфоната в 1% уксусной кислоте с добавкой ТЭМ(0,1%) 85%; 1,5 мл/мин С уважением, Роман |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
25.09.2003 // 15:32:47
Роман! Какой В6 ты определял? Пиридоксин или пиридоксаль фосфат? По В1 ты быстрей всего и попал в мицеллярный режим с перегрузкой колонки, т. к. тиамин - более сильное основание, чем В6. А В6 хвостатил быстрей всего из-за неудачно выбранного рН. И вообще, ацетатный буфер - это "два". По крайней мере с моей точки зрения. В свое время я ставил методику на нашем витаминкомбинате по анализу В6 и его полупродуктов (в "заводской лаборатории" за какой-то из конца 80-х годов есть моя довольно обстоятельная статья). Работал тогда на "Милихроме" с Сепароном С18, с фосфатным буфером рН=5 - 6 и ацетонитрилом. В качестве ион-парной добавки брал гексилсульфонат 1-2 милимоля на литр. Результат был вполне приемлемый. Далее использовал более сложные модификаторы с переходом на немодифицированный силикагель, где и получил наиболее хорошие результаты. |
|||||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
25.09.2003 // 17:01:36
Редактировано 3 раз(а) Я определял пиридоксин! По В1 не понял  перегрузка по ион-парному или по ТЭА? Интуитивно догадываюсь, что по ион-парному. Какая оптиамальная концентрация? Че то я с этими мицелами туплю. Что там за конкуренция на колонке происходит? И чем ацетатный буфер для В6 не подходит? Какой тогда лучше? Не думаю, что фосфатный. Тем более Вы работали с ацетонитрилом.С уважением, Роман P.S. Уважаемый Леонид, не могли бы Вы прислать мне,плиз, свои наработки на эту тему (epac@omsknet.ru). Я, в свою очередь, готов поделиться своими. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
25.09.2003 // 17:26:29
P.S. Уважаемый Леонид, не могли бы Вы прислать мне,плиз, свои наработки на эту тему (epac@omsknet.ru). Я, в свою очередь, готов поделиться своими. Леонид, и мне копию, если не трудно. |
|||||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
25.09.2003 // 17:30:23
Дело в том, что когда я применял систему ацетонитрил-фофатный буфер (я брал 0,05М раствор К2НРО4) при градиенте в сторону увеличения доли ACN у меня образовывался белый налет. Я естественно сделал вывлд, что это фосфат вываливается. Поэтому перешел на ацетатный буфер и метанол. С уважением, Роман |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
26.09.2003 // 9:13:03
Редактировано 1 раз(а) Роман и Андрей! Свои наработки мне еще надо разыскать, т. к. это было довольно давно и витаминами я с тех пор плотно не занимался. Но клятвенно обещаю, как только буду перебирать свой архив и найду все свои наработки по этой теме, обязательно вышлю по майлу. Далее. Фосфатный буфер хорош тем, что он абсолютно прозрачен в УФ, хорошо держит рН даже при низких концентрациях и более подходит для обеспечения нужного диапазона рН. Оптимальная концентрация - 0,01-0,05 моль/л. При добавлении ацетонитрила, в отличие от метанола, фосфат не вываливается, а высаливается лишний ацетонитрил. Тем более, что количество ацетонитрила в элюенте не такое большое, чтобы при указанных концентрациях буфера вызвать гетерогенизацию элюента. Белый осадок - это что-то не то с реактивами или пробой. Что касается В1, то перегрузка шла не по ион-парному реагенту, а по мицеллам, состоящим из конгломерата ПАВ и В1. А поскольку мицеллы довольно крупные, резко ограничивается стерическая доступность пор, ограничивается емкость сорбента. Определяемое вещество выходит гораздо раньше, а если его относительно много, то колонка перегружается. Мицеллярный режим я использовал, как хроматографический казус, чтобы быстро поделить в изократе ДОН и зеароленон. Практического применения это не нашло, но возможности этого режима я понял хорошо. Работать можно как с метанолом, так и с ацетонитрилом, большой разницы при концентрации орг. модификатора выше 10% не наблюдается. Концентрацию ион-парного модификатора нужно брать минимальную, есть смысл начать с 0,1 милимоля/л и, постепенно повышая добиться необходимого к` по анализируемым веществам. Если основность анализируемых веществ сильно разнится, то нужно работать при рН меньшем, чем рК наиболее слабого основания и использовать короткоцепочный ион-парный реагент. В противном случае, пока вы добьетесь приемлемого удерживания одного основания, другое может при данном составе элюента прочно обосноваться в колонке. Что касается ацетатного буфера, то он неизбежно подключает слабо-катионнообменный механизм, который может снижать эффективность разделения и портить ассиметрию пиков. Хотя в некоторых случаях я использовал пропионовую кислоту (правда для пептидов, а не витаминов), но она играла больше роль динамического модификатора и подавителя активности силанольных групп. Ф-Фух. Ну на первый раз достаточно. |
|||||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
26.09.2003 // 9:32:28
Да!!! Впечатляет! Вам надо лекции читать! Я не по-детски просветился! Большое спасибо!!!  Еще вопросик. Кто выступает в качестве ПАВ? С уважением, Роман |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
26.09.2003 // 10:20:50
Спасибо за комплимент. В качестве ПАВ выступают ион-парные реагенты. Алкилсульфонаты - типичные анионогенные ПАВ, а соли тетраалкиламмония - катионогенные. Иногда добавляют и неионогенные ПАВ - Твин 80 и другие оксиэтилированные производные фенолов. Да! Еще вопрос. С какой целью ты добавлял ТЭА? Обычно это делают, когда идет анализ очень основных веществ (например, аминопиридин)а под рукой нет короткоцепочного ионпарного реагента и уже минимальные добавки, например, додецилсульфата приводят к неприемлемо большому удерживания анализируемого соединения. Тогда добавка ТЭА приводит к конкуренции за места на поверхности сорбента и искомое вещество выдавливается (вытесняется) с сорбента. Но витамины - не такие жуткие основания, чтобы их делить по конкурирующей схеме. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 409
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
