Форумы ANCHEM.RU: Странности в ВЭЖХ, помогите разобратся

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Странности в ВЭЖХ, помогите разобратся >>>

  Ответов в этой теме: 146
  Страница: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

17.02.2005 // 21:11:25

Редактировано 4 раз(а)

Korvet пишет:
Да, кстати про вколы того, что раньше вышло как первый и второй пик, я забыл рассказать. Ну на хромасе понятно, говорил уже, оба - сибазон, на вэжх, опять разделились, на два, но соотношение иное. Почти 1/1. Но в той пробе которая ранее выходила как пик1 (первая по времени выхода), первого пика больше.

С этого надо было начать! Значит, все таки, скорее всего таутомеры, поскольку возможности для конформеров с затрудненным переходом я в этой молекуле не усматриваю, кроме зеркально симметричных ( www3.interscience.wiley.com/cgi-bin/abstract/63500685/ABSTRACT ), а они могут делиться только на хиральной колонке. Осталось достать или приготовить и охарактеризовать чистое вещество, и проверить еще раз. Понятное дело, прямое доказательство возможно только с on-line ЯМР, но можно косвенно проверить, посмотрев на ЯМР сам раствор в буфере (дейтерированном). Столь значительное содержание другой формы должно быть легко заметно и даже количественно оценимо.
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=pubmed&dopt=Abstract&list_uids=3009031
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_uids=5599155&dopt=Abstract

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

18.02.2005 // 10:10:53

Редактировано 1 раз(а)

Еще раз внимательно прочитал обсуждение и ссылки.
Сразу возникает вопрос. Вы определили, что оба пика - одно и то же вещество только по данным масс-спектрометрии?

Но геометрические изомеры (цис-транс, конформационные) и таутомеры по масс-спектру отличить весьма затруднительно, а их хроматографическое поведение зачастую ох как отличается.
Тут проще выделить препаративно вещества, соответствующие этим пикам, перерастворить вещества в дейтерохлороформе или ЧХУ и снять ЯМР на протонах.
Для нормального спектра достаточно менее 1 мкг вещества. Такое количество вполне реально выделить и на микроколоночном хроматографе.

albert
Пользователь
Ранг: 440

18.02.2005 // 10:48:38

Господа, наконец попался образец с двоящимися пиками. Ароматическая сульфокислота с аминогруппой. Два разделенных до базы пика, первый близко к t0, после добавления в пробу TFA остался первый (раньше как правило оставался задний пик, но раньше я говорил об основаниях, а это кислота?) + в следах второй (наверное, недостаточно подождали после добавления в пробу кислоты, по моим наблюдениям обычно нужно около получаса). Кстати, аргумент о ион-парном механизме меня не убедил, т.к. TFA - весьма слабый ион-парный реагент, а на муравьиной - все тоже самое, только в еще более выраженной форме. Всем заинтересованным лицам могу выслать хроматограммы по e-mail.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

18.02.2005 // 12:16:56

albert пишет:
Господа, наконец попался образец с двоящимися пиками. Ароматическая сульфокислота с аминогруппой. Два разделенных до базы пика, первый близко к t0, после добавления в пробу TFA остался первый (раньше как правило оставался задний пик, но раньше я говорил об основаниях, а это кислота?) + в следах второй (наверное, недостаточно подождали после добавления в пробу кислоты, по моим наблюдениям обычно нужно около получаса). Кстати, аргумент о ион-парном механизме меня не убедил, т.к. TFA - весьма слабый ион-парный реагент, а на муравьиной - все тоже самое, только в еще более выраженной форме. Всем заинтересованным лицам могу выслать хроматограммы по e-mail.

Мне, например

chromplus*list.ru

Только с подробными условиями, плиз...

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

18.02.2005 // 13:06:03

Редактировано 1 раз(а)

Korvet пишет:
Собственно вот такая интересная ситуация возникла при анализе ВЭЖХ сибазона (диазепама).
...Ну хорошо, а как вам эксперименты с другим стандартом. Теперь я стал извращатся над таблеткой...

Начнем, Андрей, сначала. Судя по бурной дискуссии на форуме, Вы проблему еще не решили. Мы поэкспериментировали сами. Суспендировали в МеОН 1 таблетку Реланиума (5 мг диазепама, производство "Polfa", Польша, годен до 1995), центрифугировали и хроматографировали: Милихром А-02; элюент А: 0.2 М перхлорат лития : 0.005 М хлорная кислота; элюент Б: ацетонитрил; линейный градиент от 5 до 100%Б за 40 мин; поток - 100 мкл/мин; температура 40 град.; детектор 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 и 300 нм;проба 4 мкл. Результат - 1 пик диазепама. На хроматограмме есть еще 2 пика (не более 2% от пика диазепама на 210 нм), которые "пришли" из МеОН. По спектру диазепам из таблетки практически совпадает со спектром диазепама из Базы данных. Хроматограмму посылаю Вам по эл.почте.
По данным Physicians GenRx (1997) таблетки диазепама могут содержать красители (Tablets: 5-mg tablets contain FD&C Yellow No. 6 and D&C Yellow No. 10 dyes. Diazepam 10-mg tablets contain FD&C Blue No. 1 dye. Diazepam 2-mg tablets contain no dye). Красителей мы на хроматограмме не видим. Я не знаю, что они из себя представляют и растворимы ли они в МеОН.
С раствором для инъекций поработаем в понедельник.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал Санитарно-эпидемиологический собеседник
На страницах журнала публикуются новые нормативные документы, специалисты отвечают на актуальные вопросы, с которыми так или иначе связана ваша деятельность, рассказывают обо всех изменениях в законодательстве, дают комментарии к новым документам (СанПиН, СП, МУК, МР).

albert
Пользователь
Ранг: 440

18.02.2005 // 13:19:51

Константин, хроматограммы выслал. Меня немного дезинформировали: после добавления TFA все-таки остался, судя по всему, 2-ой пик, а не 1-й. Ну и, естественно, протонник показывает чистоту выше 95%.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

18.02.2005 // 13:21:10

Ловлю..

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

18.02.2005 // 13:38:57

Результы поверхностного осмотра:

1. Алексей, а что Вы не посмотрели спектр козявки, которая идет после второго пика с хроматограмме с ТФА? snsychev любит называть такую штуку "перекачка форм" (мне это не нравится, ну да шут с ним). 2ой пик чуть меньше 2ого на первой хр., а площадь "козявки" почти соответствует площади 1ого пика.
Мы с ним таких хроматограмм насмотрелись просто на примере бензойной кислоты, изменяя потихоньку концентрацию кислого фосфата от нуля, в 10% ацетонитрильном водном элюенте.

2. А самое-то интересное - структура соединения?

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

18.02.2005 // 13:54:48

... хотя, как уже не раз было замечено, здесь роль могут играть множество процессов. Только в этом посте их припомнили ого-го сколько...
Когда мы снимали хромаотграммы бензойной кислоты (изократика, ввод в воде!), то там была гипотеза, что расщепление "пика" (шириной минут на 10-15) обусловлено медленным взаимодействием двух форм адсорбата на поверхности. При этом, если опираться на эту теорию, для бенз. к-ты вроде не должно быть больше двух максимумов (две формы в растворе).

Еще раз касаемо текущего случая. Таких примеров в литературе приводится достаточно много именно для таких условий, дома покапаюсь в своей пдф-ной библиотечке. Подавить расщепление можно, кажется, либо экстремальным закислением (защелачиванием) элюента (и пробы), либо применением ион-парного реагента (расщепление пиков красителей - т.е. соединений подобного рода - я добивался и просто добавлением триэтиламина в приличных количествах).

albert
Пользователь
Ранг: 440

18.02.2005 // 14:00:28

Блин, ничего не утаишь. Масс-спектр козявки имеет тот же молекулярник 202. Но он почти на порядок ниже "исчезнувшего" 1-го пика: там было 37%, а здесь от силы 4-5%. Мне кажется, в-во в присутствии такого кол-ва TFA частично рухнуло. Не знаю.
Мне тоже кажется, что в этом эффекте имеет место "переход форм". Не могу только понять, почему такой медленный.
С фокусами с бензойной к-той знаком - примерно похожая работа, если не ошибаюсь, была опубликована Кургановым с Унгером.
Структура закрытая. Но я (и не только я) такую картинку наблюдаю часто, так что со временем наверняка столкнусь с тем же самым на "открытой" библиотеке.


Ответов в этой теме: 146 Страница: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты